分析方法的方法学验证.docxVIP

一、方法验证 准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为 80％、100％和 120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 98.0%-102.0%之间，9 个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于 2.0%。 线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在 80％至 120％的浓度范围内配制 6 份浓度不同的供试液， 分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于 0.998，Y 轴截距应在 100％响应值的 2％ 以内，响应因子的相对标准差应不大于 2.0%。 精密度 1）重复性 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得 6 份供试液含量的相对标准差应不大于 2.0%。 2）中间精密度 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12 个含量数据的相对标准差应不大于 2.0%。 专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于 980。 检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3。 定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10。另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测6 份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于 2.0%。 耐用性 分别考察流动相比例变化±5％、流动相 pH 值变化±0.2 、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于 2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于 2.0%。 8、系统适应性 配制 6 份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于 1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 二、 分 析 方 法 验 证 （Validation） 进行验证，以证明分析方法符合检测的目的和要求，这就是分析方法验证。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法符合检测项目的要求。方法验证在质量控制上有重要的作用和意义，只有经过验证的分析方法才能用于药品生产的分析检测，方法验证是制订质量标准的基础。方 法 验 证 内 容 包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等， 检测目的不同验证要求也不尽相同。 专 属 性 （Speciality / Specificity） 专属性是指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为“选择 性”。对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直接用粗品，考察产品峰是否受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。必要时使用二极管阵列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。一般要求产品和杂质之间的分离度大于 2.0。 线 性 （Linearity） 线性是在设定的范围内，检测结果与样品中原料或产品的浓度呈线性关系的程度。线性是定量检测的基础，需要定量检测的项目都需要验证线性。一般用贮备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一系列被测物质的浓度（5 个以上），按浓度从小到大运行序列，以峰面积和浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归计算，考察分析方法的线性。 范 围 （Range） 范围指在能够达到一定的准确度、精密度和线性时，样品中被分析物 的浓度区间。简单的说，范围就是分析方法适用的样品中待测物的浓 度最大值和最小值。需要定量检测的分析方法都需要对范围进行验证， 纯度检测时，范围应为测试浓度的 80％～120％。 准 确 度 （Accuracy） 准确度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，所以也叫做“真实度”，需要定量得分析方法均需要验证准确度。准确度应在规定的范围内建立，对于原料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原料药进行测定，必要时可与另一个已建立准确度的方法比较结果。 精 密 度 （Precision） 精密度是指在规定条件下，同一均匀样品经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度。精密度一般用相对标准偏差（RSD）表示， 取样检测次数应至少 6 次。 精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。 a、重复性（Repeatability）：是在相同的操