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使用EB染色注意事项 （1）EB被认为是一种强致癌物质 （2）EB可用来检测单链或双链核酸 * . 4.2 Gold view Gold view是一种新型极敏感染料的商品名称。其与DNA结合的亲和力高，并且结合后，能够极大增强荧光信号。 且现在的结果表明，Gold view没有明显的毒副作用。 * . 5 所用的电压 低电压时DNA片段迁移率与所用的电压成正比。 6 电泳缓冲液 常用的有TAE、TPE及TBE * . TAE、TPE及TBE电泳缓冲液比较 都是常用电泳缓冲液。三者相比： 1）TAE的缓冲容量最低，如长时间电泳会被消耗，此时凝胶的阳极一侧将发生酸性化； 2）TBE和TPE比TAE花费稍贵，但有高得多的缓冲容量； 3）双链线状DNA片段在TAE中比在TBE或TPE中迁移快10%； 4）对于高分子质量的DNA，TAE的分辨率略高于TBE或TPE，对于低分子质量的DNA，TAE要差些。超螺旋DNA在TAE中的电泳分辨率要好于TBE。 * . 二 凝胶电泳具体实验操作 包括拿到产物之后的处理到配胶、点样、跑胶、切胶到胶回收等操作步骤。 * . 冷冻、离心。 拿到产物之后，应先置于4℃冰箱冷冻，因为产物温度高会影响跑胶的效率以及很可能造成产物的气溶胶污染，待温度降下来后，瞬时离心。 配胶。 琼脂糖凝胶。根据产物的分子量的大小需配置不同浓度的胶。见下图： * . 琼脂糖凝胶浓度% 可分辨的线性DNA大小范围/（kb） 0.3 5~60 0.6 1~20 0.7 0.8~10 0.9 0.5~7 1.2 0.4~6 1.5 0.2~4 2.0 0.1~3 * . 凝胶电泳分离纯化的原理及应用 Nucleic Acid Gel Electrophoresis 时间：2014-9-27 * . 一、背景知识介绍 二、凝胶电泳具体实验操作 三、应用 * . 一、背景知识介绍 电泳（electrophoresis）：带电物质在电场中向相反电极移动的现象 。 电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 * . 自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。 凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展，使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶，但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 * . 电泳的基本原理： 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积，即F＝QE。质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην 球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。 * . 电泳迁移率（m, electrophoretic mobility ）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度 迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的粘度成反比。 * . DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 为了获得好的电泳结果，应尽量减少电荷效应，增加分子筛效应。 * . 常用的凝胶电泳有两类 ： 琼脂糖凝胶电泳：分辨率稍低，适于较大分子 。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：分辨率高，适于较小分子。 * . 凝胶电泳的检测灵敏度 与凝胶的类型和密度相关 琼脂糖凝胶的检测灵敏度在0.2～50Kb之间; 聚丙烯酰胺的检测灵敏度在1～1000bp之间 * . 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在 碱性条件下（pH8.0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙 锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧