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分析步骤 ① 样品处理:选取有代表性的蔬菜样品,檫去表面泥土,剪成1cm左右见方碎片,取1g放入烧杯或提取瓶中,加入5mL缓冲溶液浸没菜叶,每3min摇动一下烧杯,于10min后吸取2.5mL提取液于试管,待测。 ② 测定: 对照溶液测试:于试管中加入2.5mL缓冲溶液,再加入0.1mL酶液、0.1mL底物摇匀,此时检液开始显色反应,应立即放入仪器比色池中,于410nm波长下比色,记录反应3min的吸光度变化值或仪器记录值A0。 样品测试:于试管中加入2.5mL样品提取液,其它操作与对照溶液测试相同,记录反应3 min的吸光度变化值或仪器记录值At。 ③ 结果的表述计算: 注意:使用速测仪可以直接读出抑制率值,而无须手工计算。 酶抑制法(GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001) 第三十页,共四十九页。 结果判定 酶抑制法(GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001) 第三十一页,共四十九页。 CL-1型农药残留速测仪的操作步骤 ① 将阻断光路黑块放入速测仪的比色池内,接通仪器电源,此时仪器自动进入预热阶段,显示屏显示数值为1200; ② 仪器显示数值由1200减少为0,并发出“嘀”蜂鸣声时,表示仪器预热完成(整个过程约需时15min); ③ 按下“0”按钮,进行调“0”操作,此时仪器显示数值为0或其左右的数值; ④ 取出阻断光路黑块,按下“100”按钮,进行调满度操作,此时仪器显示数值为100或其左右的数值; ⑤放入对照溶液,按下“对照”按钮,仪器将自动进行对照样品的测试,3min后,仪器发出“嘀”蜂鸣声时,表示对照溶液测试完成; ⑥取出对照溶液,放入待测样品,按下“样品”按钮,仪器将自动进行待测样品的测试,3min后,仪器发出“嘀”蜂鸣声时,表示样品溶液测试完成,此时按下再次“样品”按钮,仪器即可显示样品抑制率; ⑦其余样品的测定重复步骤⑥的操作即可。 酶抑制法(GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001) 第三十二页,共四十九页。 部分农药浓度与抑制率对照(实验条件:37℃,乙酰胆碱酯酶) 酶抑制法(GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001) 第三十三页,共四十九页。 酶抑制法的使用注意事项 葱、蒜、胡萝卜、生姜、韭菜等蔬菜中含有破坏酶活性或使蓝色产物褪色的物质,处理这类样品时,不要剪得太碎,浸提时间不要太长,必要时可采取整株(体)蔬菜浸提法。 如室温低于20℃,建议使用30℃水浴,即提取液要在水浴中预热,并且加入酶液后的试管也需要放置于水浴中,同时室温也应控制在20℃以上。 速测试剂对农药非常敏感,测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀虫剂,以及操作者和器具沾有微量农药,都会对检测结果带来影响。 速测仪长期处于开机等待状态时,应将阻断光路黑块放入速测仪的比色池内,避免仪器感光元件因过度疲劳而损坏。 标准NY/T 448—2001使用的丁酰胆碱酯酶对甲基对硫磷、乐果、毒死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏,检出浓度均在10mg/kg以上。 酶抑制法(GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001) 第三十四页,共四十九页。 方法特点 该方法是与国际接轨的一个农药残留量快速检测方法,它等同于美国公职分析化学师协会AOAC 12th 29.049-29.055《食品中有机磷农药残留测定—胆碱酯酶抑制法》方法,在国外已得到普遍的应用,检测结果更具可比性。 方法检测对象广泛(有机磷农药和氨基甲酸酯类农药),而且适用于一些基质复杂的样品,例如:蔬菜、水果、茶叶和肉等。 具有较高的灵敏度。 适用的温度范围广,在15~35℃下可直接测定,无需其它温控设施。 比色波长为600nm。 样品测定时,无需设置对照。 测定结果表示简单,无需计算抑制率,由吸光度值直接作出判定。 GB/T 186××—2002系列标准方法的应用 第三十五页,共四十九页。 蔬菜质量安全快速检测技术与应用 第一页,共四十九页。 无公害蔬菜基地的认证过程 第二页,共四十九页。 蔬菜质量安全快速检测技术的检测指标 农药残留量 (有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) 硝酸盐 亚硝酸盐 吊白块:目前主要在我国北方已经发现有一些不法商贩使用漂白粉漂白一些蔬菜,但情况尚不严重,其主要污染物为甲醛。 第三页,共四十九页。 我国现行的主流检测技术体系 检测技术体系的要求: ①满足有关标准对检测方法及设备的要求; ②操作简便,稳定度高; ③检测结果能够与其它分析机构比对。 目前全国最大的检测体系: 由农业部蔬菜品质监督检验测试中心(北京)和农业部药检所创建,并常年进行检测,具有技术成熟以及
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