多糖技术路线图.docVIP

一 提取方法：1水提醇沉 2高温水提取法 3碱提取法 4超声波提取法 5酶提取法 6复合提取法 7微博提取法 8 超高压提取 9超临界提取法 水提取法：常用温度70—90度，每次回流提取2h 酸提取：将植物用品浸泡在稀酸水溶液中，再调整溶液PH至中性，用水提醇沉得到多糖 超声波提取：适用超笔技术江植物样品浸泡一段时间，再热水浸提 超高压提取：先对物料加压再泄压，细胞内形状成压力差，植物细胞壁在高压下裂开，释放多糖。将植物样品加入水中，搅拌，调整PH，装入聚乙烯袋中在高压容器中进行高压处理，过滤减压浓缩得到多糖提取时间远少于热水提取，操作简洁，提取率高 微波提取：通过微波热效应及产生的电磁波效应，加快分子的运动，快速释放多糖 复合提取法:纤维素酶帮助超声提取 二 糖类分别方法：1溶剂处理法 2沉淀法 (铅盐沉淀法、铜盐沉淀法、钙、锶及钡复盐形成法 ) 3大孔树脂处理法 4柱层析分别法（活性炭柱层析、纤维素柱层析、离子交换柱层析、淀粉柱层析、凝胶柱层析） 5 阴离子交换色谱法 蛋白质的去除: 用分级沉淀法得到的多糖，常混有较多的蛋白质，必需予以去除。一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必需处理时间短，温度低，避开多糖降解。而要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复多次处理。除去蛋白质的常用方法有： (1). Sevag法：依据蛋白质在氯仿CHCl3等有机溶剂中变性的特点，用氯仿：戊醇或丁醇5：1或4：1混合液与糖提取物混合，猛烈震荡20～30min，蛋白质与氯仿-戊醇或丁醇溶液形成凝胶而分别，离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。 这种方法在避开糖降解上有较好的效果，但效率不高，如能协作加入蛋白质水解酶（胰蛋白酶、胃蛋白酶、链霉蛋白酶等），使蛋白质大分子进行肯定程度降解，再用Sevag法处理，效果会更好。 (2). 三氟三氯乙烷法F3C-CCl3：按多糖提取液：三氟三氯乙烷1：1混合，在低温下搅拌约10min, 离心得上层水溶液，水层反复用上述方法处理几次，即得无蛋白质的多糖溶液。此法效率高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量使用。 (3). 三氯醋酸法F3CCOOH：在多糖水溶液中滴加3%三氯醋酸，直至溶液不再连续混浊为止，在5～10放置过夜，离心除去沉淀，即得纯的多糖溶液。此法会引起某些多糖的降解。 色素的去除 植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(DEAE一纤维素)、氧化剂(H2O2)等脱除。活性炭比表面积大，吸附力量强，在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了脱色操作。此法成本低廉，适合工业化生产。 （3）透析法除无机盐、单糖、多糖 （4）季铵盐沉淀纯化 （5）金属络合物法 三 定性反应试验： （1）Molish反应 （2）Fehling反应：+α-萘酚-浓硫酸 →紫红色环 （3）邻苯二甲酸-苯胺显色反 （4）间苯二胺试验 （1）α萘酚试验（Molisch紫环反应）：取检品的水溶液1ml，加5％萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5－6滴浓硫酸，使成两液层，待2－3分钟后，两层液面消失紫红色环（糖、多糖或甙类）。 多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。 【注】①甙的分子结构中含有糖基，一般属于单糖类，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（双糖）或多分子糖（多糖）。在上述反应条件下，甙被水解成单糖，因此甙萘酚试验，系分子中糖部分的反应。 ②由于此反应较为灵敏，如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中，都能产生上述反应。故滤过时应加留意。 （2）碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液1－2ml（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入碱笥酒石酸铜试液1ml，于沸水浴上加热5分钟，产生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀，示有还原糖。 还原糖能使二价铜盐（蓝色）还原成氧化亚铜，醛糖的醛基氧化成羧基： 【注】①如检液呈酸性，应先碱化。 ②此反应所产生的沉淀由于条件不同，其颜色也不同，质点上的呈黄色，质点大的呈红色。有保持性胶体存在时，也常产生黄色沉淀。 ③职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分，或中划药制剂中附加的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应。 (3) 邻苯二甲酸-苯胺显色反应：用毛细管将样品提取液点于滤纸上，溶剂挥干后，置于绽开缸中，以甲醇为绽开剂绽开。绽开后取出滤纸，挥干溶剂，喷邻苯二甲酸-苯胺试剂。104℃烘10分钟，显红色～棕色斑点，表明有还原糖存在。 见苯二胺试验：取水提样点在滤纸上，喷洒间二苯胺试剂，在105℃加热