外科学与分子生物学.pptVIP

基因诊断：以探测基因存在，分析基因类型和缺陷以及功能是否正常从而达到诊断疾病的方法 1．? 核酸分子杂交 根据碱基互补原则，利用核苷酸单链作为分子探针检测待测基因的过程。Southern blot; northern blot; dot blot; in situ hybridization，FISH2．? 聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）：由DNA聚合酶催化，利用极微量DNA片段扩增，经过多个循环周而复始，使目的DNA片段达到扩增3．? DNA芯片技术 在固相膜片上制成成千上万个寡核苷酸点阵，以待测样本DNA 、RNA用荧光标记后与之杂交，利用激光共聚焦显微镜对芯片扫描，计算机进行信息分析? 1．? ? 人类基因组计划：human genome project,HGP由美国科学家提出，目的是将细胞内基因组DNA序列全部分析出来。美国1990年正式启动，英、法、德、日、中等国科学家共同参与，2003年4月已宣布完成人类基因组序列图 后基因组计划或功能基因组学：post-genome project, functional genomics 研究基因组中各基因的功能，目前已知功能的基因仅占小部分，大量基因功能尚待阐明 Homogenization PCR：polymerase chain reaction 是在模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸（dNTP）存在条件下由耐热DNA聚合酶在体外酶促合成双链DNA反应。其特异性取决于引物和模板DNA的特异性 PCR PCR PCR Southern blot In situ hybridization Microarray Gene diagnosis technique:microarray 基因治疗：gene therapy, 指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用 向免疫细胞导入细胞因子基因，增强机体免疫功能。包括肿瘤 坏死因子类、干扰素类、白细胞介素类（基因增补） 导入主要组织相容性复合物抗原基因（MHC），提高肿瘤抗原性，诱导特异性细胞毒性杀伤作用 导入抑癌基因。如野生型P53基因，诱导肿瘤凋亡并丧失致瘤性 遏制癌基因的表达。采用反义核苷酸序列在癌基因表达时与mRNA特异性结合，以阻遏癌基因表达（基因封闭） 导入自杀基因，将某些病毒、细菌中的前药转换酶基因——自杀基因导入癌细胞，自杀基因编码的酶类将药物前体在癌细胞内转换为毒性产物，达到杀伤肿瘤目的 外科学与免疫学Surgeryimmunology 免疫系统的组成 免疫系统，immune system： 参与免疫应答，执行免疫功能的独立解剖学结构。包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子 Thymus, bone marrow Lymphnode, spleen，mucosa associated lymphoid tissue(MALT) T、B lymphocyte, natural killer cell, antigen-presenting cell Immunoglobulin, complement, cytokine, adhesion molecule，MHC(HLA) 免疫系统组成 免疫应答的基本机理 免疫应答是由多种免疫细胞和免疫分子参与的复杂过程，根据参与主要免疫细胞的不同分为T细胞介导的细胞免疫应答和B细胞介导的体液免疫应答。免疫应答效应可保护机体免受抗原异物的侵害，但某种情况下也可导致自身组织的损伤 免疫应答三时相： 识别相、激活相、效应相 T细胞介导的细胞免疫效应机制 CD8+T cell活化需要双信号① TCR特异性识别MHC I分子-抗原肽复合物②共刺激信号或第二信号+CD4+T细胞分泌的细胞因子 T细胞杀伤靶细胞 效应细胞与靶细胞结合——杀伤①颗粒胞吐机制：穿孔素、颗粒酶、丝氨酸酯酶等②受体介导机制：Fas-FasL途径；TNF途径 B细胞介导的细胞免疫效应机制 巨噬细胞加工抗原 B细胞识别抗原决定簇 抗原肽_MHC II分子复合物 （第一信号） Th细胞活化 产生多种细胞因子（第二信号） B细胞增殖、分化为浆细胞，产生免疫球蛋白 （antibody） MHC基因 Dendritic cell and tumor antigen