dna和rna的提取与纯化.pptVIP

大肠杆菌 5S rRNA 的三级结构模型 rRNA分子 mRNA分子 原核生物和真核生物的mRNA在结构上有所不同： 1) 原核生物的mRNA是多顺反子的，真核生物的mRNA是单顺反子的； 2) 原核mRNA 5端无帽子结构，真核mRNA 5端有一段帽子结构（m7GpppNmpNmp-）； 3) 原核mRNA 3端无PolyA，真核mRNA 3端有PolyA。 利用在浓缩的盐溶液中，溴化乙锭（EB)扁平分子在ＤＮＡ碱基对之间的嵌入作用。 染色体ＤＮＡ分子线性片段具有游离的末端而易于解旋，可结合大量的EB分子。而质粒的共价闭合环状的 ＤＮＡ分子，由于没有游离末端，只能发生有限的解旋反应，结合ＥＢ分子的数量少。ＤＮＡ分子结合ＥＢ数量越多，则密度越小。密度梯度离心后，处于不同的位置，从而达到纯化质粒ＤＮＡ之目的。 2碱变性抽提法 染色体DNA为线性DNA分子，质粒DNA为超螺旋共价闭合环状 DNA. 根据共价闭合环状质粒ＤＮＡ与线性染色体ＤＮＡ片段之间 在拓扑学的差异而发展出来的。 通过加热，尤其在pH值介于这个狭窄范围内，线性的 ＤＮＡ会被变性，而cccDNA则不会变性。 即根据染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达 到分离目的。 变性处理过的质粒和染色体ＤＮＡ混合物，通过致冷或恢复中性pH，便会迅速地复性。在复性过程