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拉曼光谱及其生物学应用 朱加旺 一、拉曼光谱 拉曼光谱基本原理：拉曼散射属于光的散射，单色光子与分子发生相互作用且发生非弹性碰撞时，二者之间有能量交换，此时，光子不仅要转变运动方向，而且频率也会发生转变，这种散射称为拉曼散射。在这种散射中，光子一部分能量转移到分子中，或者分子的振动和转动能量传递给了光子，从而转变光子频率。 拉曼光谱的解释及讨论意义 2.1 以经典理论解释拉曼散射时,认为分子以固有频率vi振动，极化率（见电极化率）也以vi为频率作周期性变化，在频率为v0的入射光作用下，v0与vi两种频率的耦合产生了v0、v0+vi和v0-vi3种频率。频率为v0的光即瑞利散射光，后两种频率对应拉曼散射谱线。拉曼散射的完善解释需用量子力学理论，不仅可解释散射光的频率差，还可解决强度和偏振等一类问题。 2.1.1特征拉曼频率：拉曼光谱中的振动频率是由原子团和化学键确定的，我们称之为特征拉曼频率。分子振动时，键长和键角要同时发生双变，当分子中的某个集团与分子中与其邻近的基团无耦合作用时，其振动的频率和强度所反映的就是该基团独有的特征。由于分子是一个整体，其内部任何基团的振动都不行能完全独立的，手工同化学环境的影响，任意基团的振动频率都会发生微小的位移，这种频率位移的大小和方向就是基团化学环境变化的证据。因此，我们依据特征频率及其位移即可判定各种基团的存在与否及其化学环境的变化状况。特征拉曼频率在拉曼光谱分析中特别有用，现已总结出各类化学物的特征拉曼频率表，以供我们需要是比对和查找。 2.1.2共振拉曼散射：当一个化合物被入射光激发且及发觉的频率处于该化合物的电子汲取谱带以内时，由于电子跃迁和分子振动的耦合，会使得某些拉曼普线的强度陡然增加，这个现象被称为共振拉曼散射。 2.1.3表面增加拉曼散射：当物质分子吸附在一些特定的金属表面时，分子的拉曼散射强度得到大大提升。表面增加拉曼散射有如下特点：SERS具有很强的增加因子；SERS具有金属选择性，消失SERS现象的金属材料只有少数几种，分别是币族金属金，银，铜；碱性金属锂，钠，钾；部分过度金属铁，钴，镍；SERS要求金属表面有肯定粗糙度，不同金属消失最大SERS效应的粗糙度不一样。关于SERS的增加机理目前提出了两大类理论模型：物理增加模型和化学增加模型。物理增加模型认为SERS效应起源于金属表面局域电场的增加（又成为电磁增加）金属基底和被吸附分子之间的相互作用相对较弱。表面等离子模型，天线共振子模型和镜像场模型等均属于物理增加机制，但他们对于导致居于电磁场增加的缘由的解释是不用的。化学增加模型认为，拉曼散射信号的增加是由于吸附在粗糙金属表面的物质分子极化率转变而引起的。主要的理论模型有货为模型和电荷转移膜性。因此，对于这两大增加机制的应用需要依据详细状况做详细分析，而且在大多数状况下往往可能是两种机制同时其作用。 2.2意义：拉曼散射为讨论晶体或分子的结构供应了重要手段，在光谱学中形成了拉曼光谱学的一分支。用拉曼散射的方法可快速定出分子振动的固有频率，并可打算分子的对称性、分子内部的作用力等。自激光问世以后，关于激光的拉曼散射的讨论得到了快速进展，强激光引起的非线性效应导致了新的拉曼散射现象。 二、 蛋白质的拉曼光谱 从蛋白质的拉曼光谱可以同时得到很多珍贵信息。分析蛋白质的拉曼光谱，不紧能够得到有关的芳香族组成氨基酸的信息，而且还能进一步得到二级结构的信息，包括定量估量。不但能够得知主链构象，特殊是氨基酸 = 1 \* ROMAN I、 = 3 \* ROMAN III、C-C、C-N伸缩振动，还可得知他的侧链构象，如苯丙氨酸的单机取代苯基环，色氨酸的吲哚环和酪氨酸的对羧苯基环的信息，一级后二者存在形式随其微环境而变化的信息。还可以讨论构想灵敏的基团（电离的羧基、硫基、S-S键C-S键构想变化。对于残基内氢键的变化也能供应一些信息。 蛋白质的拉曼光谱 1.1主链构象：蛋白质的主链构象的拉曼光谱简单、多样，它们主要由肽键和骨架C-C和C-N对光散射产生的。肽键（-CONH-）产生不同类型的振动（如酰胺A、酰胺B、酰胺 = 1 \* ROMAN I、 = 2 \* ROMAN II、 = 3 \* ROMAN III、 = 4 \* ROMAN IV、 = 7 \* ROMAN VII）的谱带。其中酰胺 = 1 \* ROMAN I、 = 3 \* ROMAN III产生特别重要的谱带，这些谱带是蛋白质构想变化的灵敏探针。 1.2蛋白质二级结构的定量估量：在水中，蛋白质接近自然?状态，因此，在该状态测定蛋白质的二级结构，对于讨论蛋白质的结构与功能的关系有重大意义。现有很多种方法测定蛋白质二级结构，线面介绍常用的Lippent法。该方法是由已知二级结构的蛋白质的