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Slit2促进干细胞向神经细胞分化的作用
[摘要]目的探究慢病毒介导分泌型糖蛋白神经生长导向因子2(slit2)过表达载体转染对骨髓间充质干细胞(bmscs)向神经细胞转化的作用。方法利用基因过表达技术,构建slit2过表达载体;慢病毒转染bmscs;利用流式细胞仪检测bmscs的表面蛋白,rt`-pcr和western`-blot方法检测空白对照组、空载体病毒组和过表达载体病毒组神经细胞表面蛋白胶质纤维酸性蛋白(gfap)和神经元特异性烯醇化酶(nse)的表达。结果第2代bmscs表面cd44、cd29、cd34和cd45的表达率分别为60.2%、58.3%、3.4%和2.6%,慢病毒转染效率为90%以上。空白对照组、空载体病毒组和过表达载体病毒组的gfap、nsemrna和蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(f=9.089~13.893,p0.05);其中过表达载体病毒组的gfap、nsemrna和蛋白相对表达量明显高于空载体病毒组(p0.05),空载体病毒组和空白对照组比较差异无显著性(p0.05)。结论slit2过表达质粒可以提高bmscs向神经细胞转化的效率,为神经损伤和脊髓损伤提供种子细胞。
[关键词]神经生长因子;骨髓;间充质基质细胞;神经胶质原纤维酸性蛋白质;磷酸丙酮酸水合酶
[abstract]objectivetoexploretheeffectoflentivirus`-mediatedoverexpressionofslit2onthetransformationofbonemarrowmesenchymalstemcells(bmscs)intoneuralcells.methodsaslit2overexpressionvectorwasconstructedandusedtotransfectbmscsvialentivirus.flowcytometrywasusedtodetectsurfaceproteinsofbmscs.rt`-pcrandwesternblotwereusedtodeterminetheexpressionofglialfibrillaryacidicprotein(gfap)andneuron`-specificenolase(nse)onthesurfaceofneuralcellsinblankcontrolgroup,emptylentiviralvectorgroup,andoverexpressionlentiviralvectorgroup.resultstheexpressionofcd44,cd29,cd34,andcd45was60.2%,58.3%,3.4%,and2.6%,respectively,onthesurfaceofthesecondgenerationbmscs.thetransfectionefficiencyoflentiviruswasover90%.thereweresignificantdifferencesinrelativemrnaandproteinexpressionofgfapandnsebetweentheblankcontrolgroup,theemptylentiviralvectorgroup,andtheoverexpressionlentiviralvectorgroup(f=9.089-13.893,p0.05).theoverexpressionlentiviralvectorgrouphadsignificantlyhigherrelativemrnaandproteinexpressionofgfapandnsethantheblankcontrolgroupandtheemptylentiviralvectorgroup(p0.05),whiletherewerenosignificantdifferencesbetweentheblankcontrolgroupandtheemptylentiviralvectorgroup(p0.05).conclusiontheslit2overexpressionplasmidcanpromotetheefficiencyofthetransformationofbmscsintoneuralcells,whichprovideseedcellsfornerveinjuryandspinalcordinjury.
[keywords]nervegrowthfactor;bonemarrow;mesenchymalstromalcells;glialfibrillaryacidicprotein;phos
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