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大荔冬枣茎段丛生芽诱导初步研究 　　摘要：为建立高效的大荔冬枣无病毒苗组培快繁体系，以大荔冬枣茎段腋芽作为外植体，ms为基础培养基，研究不同消毒组合对其外植体的消毒效果以及不同植物生长调节剂组合对丛生芽诱导、增殖的影响。结果表明，大荔冬枣茎端经75%酒精处理30s，0.1%hgcl2消毒11min，消毒效果最佳，污染率最低且无死亡;不同激素配比对大荔冬枣茎段腋芽的萌发均有一定的促进作用，且差异极显著（p0.01），在ms+6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/l的培养条件下丛生芽诱导率最高，为83.33%。研究结果可以为大荔冬枣无毒苗的选育和获取及其规模化繁殖提供理论基础和技术支持。 　　关键词：大荔冬枣;快繁;丛生芽;诱导 　　中图分类号s567文献标识码a文章编号1007-7731（2019）10-0023-03 　　枣（ziziphusjujubamill）为鼠李科枣属植物，原产于中国，是我国具有代表性的古老特色果树之一[1]。枣树适应性强，在我国分布面积广，大面积种植主要集中在河北、山东、河南、陕西等地，这几个省份的栽培面积和产量占全国的90%左右[2]。因各地环境与土壤条件的不同，生产出枣的品质也存在一定的差异。大荔冬枣是陕西省大荔县特有的冬枣品种，果实中的维生素a、维生素e、camp、钾、钠、铁、铜等含量均较高，不仅具有保持毛细血管畅通、防止血管壁脆性增加的功能，而且对预防高血压、动脉粥样硬化病症也有一定的效果。 　　目前，大荔冬枣的育苗方式一直采用较为传统的无性繁殖，主要包括分蘖法、嫁接法和扦插法，这几种繁殖方法不仅生产出的幼苗存活率低，而且育苗周期长[3]，在急需大规模繁殖且种源较少的情况下，继续使用传统无性繁殖方法，将会限制大荔冬枣的大规模推广，且会失去很好的市场机会。传统无性繁殖无法去除新生苗体内的病毒，使一些有害病毒代代相传，危害日益严重，如病毒引起的枣疯病[4]以枣树为介质传播的，对枣树有毁灭性危害，所有枣树栽培区几乎都存在。而植物组织培养技术不仅可以在短期内快速大量繁殖，并且可以彻底去除母体内的病毒。 　　為此，笔者首次采用植物组织培养技术，研究不同消毒组合对大荔冬枣外植体消毒效果的影响以及不同植物生长调节剂组合对丛生芽诱导、增殖的影响，以期为大荔冬枣无毒苗的选育和获取以及规模化繁殖提供理论基础和技术支持。 　　1材料与方法 　　1.1实验材料大荔冬枣采自陕西省大荔县冬枣种植园，采当年新生枝条为外植体材料。 　　1.2实验方法 　　1.2.1外植体消毒将采集的枣树枝条洗净，剪成1～2cm带腋芽的小茎段，放入干净烧杯中，用蒸馏水冲洗30min后75%乙醇消毒30s，蒸馏水冲洗3～5次，再用0.1%hgcl2分别消毒3、5、7、9、11min，蒸馏水冲洗5次。用剪刀剪去外植体茎段两侧与消毒液接触部位，接种于芽诱导培养基中：ms+蔗糖20g/l+琼脂6g/l。每组接种6个，培养10后观察其污染情况。培养条件：温度（25±2）℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。 　　1.2.2大荔冬枣丛定芽的诱导将消毒完成的茎段接种至以ms培养基为基础培养基[5]，添加6-ba（0.5、1.0、2.0mg/l）和naa（0.05、0.1、0.2mg/l）共9组不同激素配比的芽诱导培养基中。其培养基成分为：ms+蔗糖20g/l+琼脂6g/l+6-ba+naa。每组接种20个，分别于培养5、15、30d时观察其生长状况。培养条件：温度（25±2）℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。丛生芽诱导率（%）=（诱导的丛生芽数/接种的茎段数）×100。 　　1.2.3数据处理对所得数据进行spss19.0进行方差分析及多重比较分析。 　　2结果与分析 　　2.1不同消毒时间对大荔冬枣外植体消毒效果的影响由表1可知，在接种数相同的条件下，外植体污染率与死亡率随0.1%hgcl2消毒时间的增加而逐渐降低。以0.1%hgcl2消毒3min时，外植体污染率最高（100%），且死亡率最大（100%）;0.1%hgcl2消毒11min时，外植体污染率最小（16.7%），并且没有死亡外植体，死亡率为0。因此，大荔冬枣外植体经75%酒精处理30s后，再经0.1%hgcl2消毒11min，消毒效果最佳，污染率最低且无死亡，为最佳消毒组合。 　　2.2不同激素浓度组合对丛生芽诱导的影响外植体消毒后接种至由6-ba和naa组成的不同激素浓度的芽诱导培养基中，培养5d左右，大荔冬枣茎段出现圆球状小芽（图1a），随后不断突起变大（图1b），同时茎段逐渐枯萎死亡，15d后统计其各激素梯度的芽诱导情况。由表2和表3可知，不同浓