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不同干燥方法对铁皮石斛多糖和甘露糖含量的影响
摘要:通过真空冷冻、红外线、微波及烘干四种方法干燥铁皮石斛,利用高效液相色谱法对甘露糖含量进行检测;利用比色法对多糖含量进行检测,对比不同干燥方法对铁皮石斛甘露糖及多糖含量的影响。结果真空冷冻干燥样品中保留了最高的甘露糖及多糖含量,而且较其他三种干燥方法更優(p0.05)。是干燥铁皮石斛最理想方法。
关键词:甘露糖;多糖;铁皮石斛;干燥方法
铁皮石斛干燥茎或者新鲜茎又被称为“铁皮兰”,具有生津益胃、润肺止咳的作用。铁皮石斛活性成分以多糖为主,包括抗炎、免疫功能增强等。铁皮石斛鲜药保存难度较大,加热烘干处理期间,其品质及药物作用效果通常受到不同程度的影响。针对不同干燥方法对铁皮石斛甘露糖及多糖的影响进行探析。
研究资料与方法
研究资料
试材:选取本区新鲜铁皮石斛、无水葡萄糖、d-甘露糖标准品、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮和氨基葡萄糖盐酸盐。
仪器:alpha1-2ld真空冷冻干燥机、ws70-1型红外线快速干燥器、nn-k5440mf微波炉、dhg-9053a型电热恒温鼓风干燥箱、ld4-8型低速台式离心机、uv-2550紫外线可见光光度计。
方法
铁皮石斛不同干燥方法。选取新鲜石斛茎30g,将其切成若干小段每段0.5cm。
烘干干燥:平摊至温度为65℃的鼓风干燥箱中干燥72h,在其含水量是1.945%后将其制成粉末。红外线干燥:平摊于红外线快速干燥机中干燥7h,在含水量是1.747%后制成粉末。微波干燥:平摊置于微波炉中干燥10min,在含水量检测为1.856%后制定粉末。真空冷冻干燥:置于-20℃冰箱中预冻2h,然后平摊置于真空冷冻干燥剂干燥72h,含水量检测为1.999%后制成粉末。
检测石斛多糖含量。苯酚-硫酸法获取标准曲线:精密称取9mg无水葡萄糖,定容到100ml,精密量取1.0、0.8、0.6、0.4、0.2ml,每个补水到1.0ml,在波长为480mm条件下,通过紫外线分光光度计对吸光度值进行检测。横坐标(x)为质量浓度,纵坐标(y)为吸光度值,对无水葡萄糖标准曲线进行绘制,获取现行方程:y=9.226x+0.0418(r=0.9997)。
制备样品溶液:采取精密仪器称取0.3g样品粉末,添加去离子水200ml,加热回流2h,定容到250ml后,抽取2ml滤液,添加无水乙醇10ml,以每分钟4000r的速度离心20min,将上清液去除,待沉淀后采用80%乙醇清洗2次,8ml/次,沉淀后通过热水溶解,定容到25ml,获取样品多糖水溶液。
通过苯酚硫酸法对多糖含量进行检测:采取精密仪器称取1.0ml样品溶液,精密添加1ml的5%苯酚溶液,均匀摇晃,然后添加5ml硫酸,在沸水浴中积热20min,放置于冰浴中冷却5min,然后对样品溶液中吸光度值进行检测,并对铁皮石斛多糖含量进行计算。
检测甘露糖含量。色谱条件:xdb-c18柱;流动相为乙腈-0.02mol/l的乙酸铵溶液;波长及流速分别是250mm和1.0ml/l;柱温及进样量分别是30℃和5μl。
制备标准品溶液:将氨基葡萄糖盐酸盐0.6g加水定容到50ml视为内标液。选取10mgd-甘露糖放入至100ml容量瓶中,并谈价内标液1ml,均匀摇晃,定容到刻度线,选取100μl联合400ml的0.5mol/lpmp甲醇溶液及400ml的0.3mol/lnaoh混合液,将其置于70℃水浴中保温100min。然后添加500μl的0.3mol/lhcl,均匀摇晃,采用2ml三氯甲烷进行清洗3次,过水膜,选取5μl样品液,将其置于液相色谱仪中,将色谱图记录下来,对d-甘露糖及内标峰面积进行检测。
制备样品溶液:选取0.12g样品粉末,分别添加200ml的80%乙醇,在索氏提取器中加热回流4h,在烧杯中添加100ml水及2ml内标液,煎煮1h,冷却后定容到100ml,均匀混合,离心,获取样品提取液,抽取1ml上清液,并将其放置在空瓶中,添加3.0mol/lhcl0.5ml,缝合,混合摇匀,置于110℃水肿水解1h,冷却后,通过3.0mol/lnaoh对ph进行调整直至中性,获取样品水解液。抽取样品400μl水解液,添加0.5mol/lpmp甲醇溶液,然后抽取5μl样品溶液将其置于液相色谱仪中,将内标峰面积和甘露糖记录下来,并对甘露糖含量进行计算。
观察指标
比较不同干燥方法对铁皮石斛多糖及甘露糖含量的影响。
统计学方法
应用统计学软件spss19.0处理本次研究中的计量资料(±s)和计数资料(%
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