蛋白质的wesrern印迹分析.pptVIP

4.3 蛋白质一级结构的测定 第四步、分析多肽链的N-末端和C-末端 多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸和C-端氨基酸。 N-端氨基酸和C-端氨基酸分析的目的是建立两个重要的氨基酸序列参考点。 4.3 蛋白质一级结构的测定 N-端氨基酸测定——DNFB法 测定路线：DNFB→DNP-肽→酸水解→乙醚萃取→层析鉴定 。 特点：α-DNP氨基酸容易和侧链DNP氨基酸分离。 4.3 蛋白质一级结构的测定 N-端氨基酸测定——丹磺酰氯法 测定路线：DNS- DNS-肽→酸水解→乙醚萃取→层析鉴定 。 特点：DNS-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。 4.3 蛋白质一级结构的测定 N-端氨基酸测定——PITC法 测定路线：PITC→PTC-肽→PTH-氨基酸→乙醚萃取→层析鉴定 。 特点：只切去N端-氨基酸，其余肽端保持完整。 4.3 蛋白质一级结构的测定 N-端氨基酸测定——氨肽酶法 氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个的向里水解肽键。 根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。 常用的有亮氨酸氨肽酶（水解N-末端为Leu的肽键速度最快）、焦谷氨酸氨肽酶（水解N-末端为焦谷氨酸，即环化的谷氨酸）。 4.3 蛋白质一级结构的测定 测定路