《细胞活体染色技术》.pptx

实验三、细胞活体染色技术 演讲人：赵鹏飞 编辑课件 一、实验目的 学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。 编辑课件 二、实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色并且呈现染成蓝色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。 编辑课件 中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定专一性。 盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料，可溶于水，它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。它还常用于检测细胞膜的完整性。 编辑课件 三、实验用品 (一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 (二)器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、水纸等。 (三)试剂： l、Ringer氏液 2、1／3000中性红溶液 3、1／5000詹纳斯绿B 4、台盼蓝染色液 5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等 编辑课件 四、实验方法 (一)液泡系的中性红活体染色 l、用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l一2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。 2、在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5一10分钟。 3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形态、大小如何、分布位置。 编辑课件 (二)线料体的活体染色 l、用植物细胞观察线粒体的活体染色 (1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯绿B染色约30分钟。 (2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形状。 2、用动物细胞观察线粒体的活体染色。 (1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。 (2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹没。 编辑课件 (3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。 (4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。 (5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。 3、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 编辑课件 (1)取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。 (2)用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。 (三)台盼蓝染色鏊别死活细胞。 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显微镜下观察。 编辑课件 THANK YOU! 编辑课件