第三十四章抗微生物药物和敏感性试验.pptVIP

微生物测定法 与琼脂扩散法原理相似。用已知含药浓度 的纸片加到混有一定指示菌悬液浓度的倾 注平板表面，35℃孵育16－20h，量取抑菌 圈直径。以抑菌圈直径为横坐标，含药浓 度为纵坐标，画出标准曲线。然后在标准 曲线找出体液测试的抑菌圈直径相应的含 药浓度。 （二）血清抗菌活性测定 体内抗菌药物活力的测定方法即为抑菌 力和杀菌力测定，称为血清杀菌活力试 验。 本法是取感染患者血液分离的血清对感 染部位分离确证的病原菌的抑菌和杀菌 能力，为供临床现用抗菌药的疗效考核 评价以及感染预后的判断提供实验依据。 采用体外抑菌试验和体外杀菌试验。无肉 眼可见菌生长的血清最高稀释管代表患者 血清的抑菌力，其菌落计数等于或小于0.1％ 最初接种菌量的血清最高稀释管代表患者 血清杀菌力。血清抑菌力／杀菌力＞1：8 常提示治疗方案有效。 九、自动化仪器检测 Viter－ATB系统和Microscan是半自 动或全自动细菌鉴定和药敏系统，通 过系统中药敏专家系统可报告分离菌 的药敏结果。 第三节 细菌耐药性和产生机制 一、细菌的耐药性 对某种抗菌药物敏感细菌变成对该药 物耐受称细菌耐药性。它可分为天然耐 药和获得性耐药，前者是通过染色体DNA 突变而致，后者往往是由质粒。噬菌体 及其他遗传物质携带外来DNA片段导致产 生的耐药性。 突变可由细菌自发产生或在X线等物理因素 或化学物质诱导产生，一般只对一种或两 种相似药物耐药，在细菌耐药性上不占主 要地位。接合型质粒通过接合方式，非接 合型质粒通过转化。转导、转换形式产生 耐药 。 二、细菌耐药性的生物化学机制 1.产生β－内酰胺酶，水解药物β－内酰 胺环而失去抗菌活性。 2.产生钝化酶使抗生素失活 ，钝化酶有三类： ① 氨基糖着类钝化酶 ； ②氯霉素乙酸转移酶； ③红霉素酶和其他灭活酶。 3.青霉素结合蛋自改变导致对抗生素的 亲和力下降 。 4.药物作用靶位的改变使抗生素不易结 合产生耐药性。 5.抗菌药物渗透障碍，如外膜蛋白减少 和药物外排作用等。 6.代谢途径的改变 。 第四节 细菌耐药性检查方法 一、细菌耐药性表型检测 某些特殊菌耐药表型检测的方法： （一）琼脂筛选试验 以单一药物单一浓度检测耐药性称耐药筛选试 验，临床上常用于对耐甲氧西林葡萄球菌、耐 万古霉素肠球菌，对庆大霉素或链霉素高水平 耐药的肠球菌。在含一定浓度测试药物的特殊 培养上，点种0．5麦氏比浊度直接菌落配制细 菌悬液，35℃孵育24h后观察平板上是否有菌 落生长识要有1个菌落生长，均视为耐药。 （二）折点敏感试验 仅用特定抗生素浓度（敏感、中介或耐药 折点MIC）而不使用测定MIC时所用系列对 倍抗生素浓度测试细菌对药物的敏感性称 折点敏感试验。当选择区分中介和耐药折 点值药物浓度时，若两种抗药物浓度培养 基均生长可判断为耐药；如在两种药物浓 度均不生长则为敏感；仅在较低药物浓度 培养基中生长提示为中介。 （三）双相纸片试验 挑取在血平板上菌落，稀释成0．5 麦氏 浓度菌液。均匀涂布于 MH平板。中央贴 上阿莫西林/克拉维酸纸片，在距该纸片 25mm处分别贴头孢噻肟或头孢曲松 、头 孢他啶和氨曲南等药敏纸片作为指示剂， 35℃孵育18h观察结果。若指示剂在朝向 阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大的 现象（协同现象），则说明待检菌产生超 广谱β－内酰胺酶。 （四）自动化仪器 自动化仪器Microscan有测定抗菌药物抑 菌的MIC值功能。 原理是先测定细菌对抗生素的MIC值，当头 孢他啶与头孢他啶十克拉维酸的MIC比值或 头孢噻肟与头孢噻肟十克拉维酸的MIC比值 大于或等于8（即3个对倍稀释度）即判定 为此细菌产生ESBL。 二、 β－内酰胺酶检测 1.头孢哨噻吩滤纸片法 用接种环挑取受试菌于商品化头孢哨噻 吩滤纸片上，于10分钟内由黄色转变为 红色即阳性结果，示产色头孢菌素的 β－内酰胺环被酶打开。 2 .碘淀粉测定法 用接种环挑取受试菌混于青霉素溶液中， 室温下振摇30分钟。加入淀粉液后，再加 入碘液，溶液变蓝，继续振摇。若检测菌 产生酶，则可水解青霉素β－内酰胺环变 为青霉素噻唑酸，后者与碘结合，使碘淀 粉复合物转变为无色，10分钟之内蓝色消 失者为产酶株。 三、耐药基因检测 （一）常见的耐药基因举例 基 因 耐药抗生素 细菌种类 基因大小bp Ant(4’）