结构生物学等.pptVIP

缺点：样品必须为晶体（单晶）,但生物大分子结晶困难,特别是膜蛋白和病毒等分子组装体结晶更是困难. 其次对于像病毒那样大的分子组装体,测量其精细结构十分复杂. 原因有二: 一是大晶胞含有的原子极多,X射线衍射点极多,常常无法区分、辨认和探测; 其二是大晶胞所产生的衍射点强度过弱,特别在高分辨时,无法与背景区分. NMR也是测定生物大分子结构重要手段 基本原理：核磁共振现象( nuclear magneticresonance spectroscopy ,NMR) 1946 年由哈佛大学的伯塞( E.M.Purcell) 和斯坦福大学的布洛赫(F.Bloch) 所领导的2个小组,用不同的方法在各自的实验室里观察到的,伯塞尔使用的实验方法是吸收法,而布洛赫使用的是感应法. 利用物理原理,通过对核磁共振谱线特征参数的测定来分析物质的分子结构与性质。NMR 不破坏被测样品的内部结构，是一种无损检测方法。由于不同的原子核吸收不同的电磁波，因而通过测定和分析受测物质对电磁波的吸收情况就可以判定它含有哪种原子，原子之间的距离有多大，并据此分析出它的三维结构。 以蛋白质为例,它的二级结构如α螺旋,β折叠、转角、环形和卷曲等,体现了蛋白质分子主链原子在三维空间各种不同的排列规律性. 位于不同二级结构域的原子核间距,原子核间的相互作用以及多肽段的动态特性,都直接反映蛋白质三维结构的特征. 这些具有不同结构特征的原子核间距、肽键二面角、肽键的动态特性等都具有特征的核磁共振谱线. 因此,我们分析核磁共振谱就可以获得蛋白质的三维结构. 1H,13C,15N是核磁共振检测的主要对象,各有不同的共振频率,从而形成核磁共振氢谱、碳谱和氮谱三部分. 结构生物学的研究方法和技术 生物大分子要发挥功能，必须满足两个条件: 第一，凡要发挥功能和活性的生物大分子必须具有特定的，自身特有，相对稳定的三级结构; 第二，结构运动。任何的破坏促使没有稳定的三级结构和结构运动，生物大分子是很难发挥生物功能或活性的。 结构生物学概念及主要研究方法 结构生物学是通过确定生物大分子三级结构，来研究生物大分子的结构功能关系，从而探讨生物大分子的作用机制和原理作为研究目的。 主要研究方法: X- 射线晶体衍射方法（X- 射线蛋白质晶体学） 多维核磁共振（ NMR ） 电镜晶体学和电镜三维重组方法 结构生物学的发展 60年代 当时的开文迪许实验室的M.Perutz J.Kendrew 用X-射线晶体衍射技术获得了球蛋白的结构.由于X射线晶体衍射技术的应用，使我们可以在晶体水平研究大分子的结构，在分子原子基础上解释了大分子. 由于他们开创性的工作，Waston ,Crick获得了1962年的诺贝尔生理学与医学奖,M. Perutz和J.Kendrew获得了同年的化学奖. 从那时起，技术的发展就成为结构生物学发展最重要的决定因素。 起源：1950s, Waston, Crick 发现了 DNA双螺旋结构，建立DNA的双螺旋模型。 60-70年代,在同一实验室的他们又发展了电子晶体学技术，当时的研究对象主要是有序的,对称性高的生物体系，如二维的晶体和对称性很高的三维晶体。 70-80年代，多维核磁共振波谱学的发明使得在水溶液中研究生物大分子成为可能,水溶液中的生物大分子更接近于生理状态. 80年代到本世纪初,冷冻电子显微镜的发明,这种技术的发明使我们不仅能够研究生物大分子在晶体状态和溶液状态的结构，而且能够研究研究复杂的大分子体系超分子体系，这就是细胞器和细胞. 可见结构生物学的发展过程经历了从结晶到溶液再到大分子体系,超分子体系,如核糖体(ribosome),病毒,溶酶体(lysosome),线粒体等.  X- 射线晶体衍射方法 X射线单晶衍射技术是由H. W. 布拉格和W.L. 布拉格父子于1912 年提出和发展起来的. 此技术最先用于无机晶体分析,后来到1953 年,沃森和克里克用于DNA 晶体分析,至60 年代,肯德鲁和佩鲁兹用于研究血红蛋白和肌红蛋白,逐渐成为生物大分子晶体结构研究的重要手段,直至今天仍占据统治地位。 优点是分辨率高,达到原子分辨率,既可研究水溶性蛋白、也可研究膜蛋白和大分子组装体与复合体。它能给出生物大分子的分子结构和构型,确定活性中心的位置和结构,从分子水平理解蛋白质如何识别和结合客体分子,如何催化,如何折叠和进化等生命的基本过程,进而阐明生命现象。 如1997 年底,应用X 射线单晶衍射方法完成了有关核小体(nucleosome) 的核心颗粒分辨率为0128nm的精细空间结构的测定,每个核小体的盘状核心含有8个组蛋白形成的八面体、外绕146 个碱基对组成的DNA ,这一杰出的成就对了解基因转录、DNA复制与修复的动态过程都很重要. 此外,应用X 射