试谈园林植物的组织培养育苗.pptVIP

第七节 园林植物的组织培养育苗 概述 1 繁殖速度快 2 繁殖脱毒苗 3 不受季节限制 组织培养繁殖的基本原理 细胞全能性 植物体中每个完整细胞核的细胞，都具有该植物的全部遗传信息和产生新的完整植株的能力。 体细胞（植株的一部分） 完整植株 组培条件 组培室的建立 准备室 接种室 培养室 植物组织培养设备 1.灭菌设备：高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。 工作原理：在密闭的蒸锅内，0．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打开入入气阀，取出灭菌材料。 注意事项：①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；③高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。因此，调PH值时，可适当调高0.－0.3个单位。 2.接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。 使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。 电炉 推车 灭菌器 接种器具 酒精灯 培养瓶 封口膜 3.培养设备 ①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。 ②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及暗培养。 ③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。 4.驯化设备 ①温室 ②防虫网室 5、其它辅助设备 ①培养基灌装机及洗瓶机 ③ 除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。 ②空调机：用于接种室和培养室温度的控制。 ④烘箱：用于干燥洗净后的玻璃器皿，还可用80℃的温度烘干组织培养植物材料以测定干物质。 ⑤冰箱：用于在常温下易变性或失效的试剂和母液的储藏，细胞组织和试验材料的冷冻保藏，以及某些材料的预处理。 ⑥纯水机与蒸馏水发生器： 是实验室必备的仪器。 ⑦天平和显微镜：天平包括分析天平，电子天平，药物天平等，用于制备母液时培养基组成成分的称取。如一些需要量少的激素和微生素类物质，天平的精确度要到0.0001g，这就要求精确度更高的分析天平。 显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。 ⑧酸度计：用于校正培养基和酶制剂的PH。 培养基成分 基本组成 无机元素 1 大量元素：N P K C a Mg S 2 微量元素: Fe B Zn Cu Mo Cl 有机成分 维生素 肌醇 氨基酸 糖 蔗糖 葡萄糖 果糖 琼脂（0.5~0.8%） 琼脂粉 琼脂条 植物生长调节剂 细胞分裂素类 KT 6-BA ZT 生长素类 IAA IBA NAA 2,4-D 赤霉素类 GA3 天然添加物 椰子汁 酵母提取液 土豆汁 麦芽提取物等 水 蒸馏水 纯净水 自来水 pH值（5.6~5.8） 1mol/L HCl 或 NaOH 其它 吸附剂（活性炭） 抗氧化剂（Vc 柠檬酸等） 培养基种类 MS培养基 Miler培养基 Nitsch培养基 H培养基 White培养基 N6培养基 培养条件 温度：25℃左右 光照：3000lx~10000lx 时间：12~16h 操作技术 *