《细胞培养基础知识》.pptx

WALVAX Introduction;内容;抗体基本概念及抗体结构;抗体基本概念及抗体结构;抗体基本概念及抗体结构;单克隆抗体和基因工程单抗;单克隆抗体和基因工程单抗;鼠单克隆V区人源化（CDR移植） ;鼠抗体 嵌合抗体 66% 人源化抗体 90% 全人抗体100%;单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏;细胞基础知识;;3、细胞的基本结构 在亚显微结构水平上，细胞基本结构大体可以分成三种体系：主要由脂蛋白构成的生物膜系统，如细胞膜、核膜及一系列重要细胞器如：线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体和液泡等的封闭膜；第二类主要由核酸蛋白成分构成的颗粒与显微结构系统，如染色质与核仁基质，核蛋白体等；第三类有蛋白质构成的细胞骨架（主要是微丝与微管），中心体、纺锤体、纤毛、鞭毛等专门结构。;4、细胞作为生命活动的基本单位的共同特点：首先所有细胞表面均有一层脂蛋白成分的生物膜，使细胞能与周围环境保持相对独立性：其次所有细胞都有两种核酸，即DNA和RNA作为遗传信息的复制和转录的物质基础；第三作作为蛋白质合成的“机器”-核蛋白，是一切细胞不可缺少的基本结构；第四所有细胞都是以一分为二的分裂方式增值。第五细胞具有多样性，形状、大小、悬殊很大，结构复杂程度也很不一样。 5、原核细胞与真核细胞：这两种细胞是根据进化程度与结构的复杂程度来划分的。原核细胞（Procarytic cell）它没有典型的核结构，没有核膜，只有一个比较集中的核区，其中分布着环装DNA丝，细胞内缺少重要细胞器，但有时有核蛋白体及游离的质粒（plasmid），原核细胞的繁殖以直接分裂（无丝分裂）为主，DNA复制、RNA转录与蛋白质合成同时连续进行。 ;6、从进化角度真核细胞与原核细胞有两点区别，第一细胞膜系统的分化与演变不同。真核细胞以膜系统的分化为基础，分化成各种重要的细胞器；第二遗传信息与遗传装置的扩增与复杂化程度不一。真核细胞（Eucaryotic cell）进化程度高，结构相当复杂。;细胞周期（细胞分裂周期）即单个细胞的生长过程，指母细胞分裂后形成的细胞到下一次再分???成两个子细胞之间的时期。细胞的增殖是生物最根本的特征，细胞是借助分裂来进行增殖的。通过细胞分裂即可将复制的遗传物质平均地分配到两个子细胞中。;间期 G1期：DNA合成前期或细胞分裂后期。这一期细胞代谢比较活跃，RNA，蛋白质合成旺盛，为S期的DNA合成做好准备，此期后阶段，中心体会进行分裂。这一期从细胞生理变化上有一个矫正点（R点），由于各种内外因素的影响，它可能控制G1期的延续时间变化，因此G1期的长短变化极大。;M期;单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏;20;21;22;23;24;25;26;27;28;29;30;31;32;33;34;35;36;37;单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏;39;40;41;42;43;44;45;46;47;凡是带入超净工作台内的物品表面要用消毒剂进行外表面消毒。 靠近酒精灯火焰操作。 玻璃器皿使用前必须过火灭菌。 打开和盖上盖子前后灼烧瓶颈和盖口附近。 无菌级别高的物品不能触碰无菌级别低的物品。手不能从敞开的瓶口上方经过。 各种操作靠近酒精灯灯，动作轻、准确，不能乱碰。 吸取两种以上的溶液时要注意更换吸管，防止交叉污染。;49;单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏;细胞培养基本概念 细胞培养技术：从体内组织取出细胞模拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。 原代培养：从体内取出组织或细胞的第一次培养，应该定义为首次成功地传代培养之前的培养为原代培养。 传代：无论是稀释，将细胞从一个培养皿中转移或移植到另一个培养皿中的继续培养即称为传代或传代培养，也称再培养。 单层培养：培养细胞在底物上分裂增殖，平铺长成单层细胞。一方面细胞可能长满培养空间，另一方面细胞之间相互接触而发生接触抑制，细胞的生长速度逐渐减慢甚至停止。;悬浮培养：细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖，这些细胞无依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。 细胞系：原代培养物经首次传代成功后即为细胞系。由原细胞系分离出具有与原细胞系不同性状的细胞系称为亚系。 细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物为细胞株。 细胞密度：细胞制备成细胞悬液或细胞在体外悬浮培养时，在没毫升悬液中所含细