AgilentLC色谱及色谱柱疑难解答.pdfVIP

 Agilent LC 色谱及色谱柱疑难解答    如何避免基线飘移？ 基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然 后使用新溶剂。 向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波 动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱 和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是 HPLC 级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。  如何减少基线噪音？ 无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前 处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。 连续噪音有可 能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵， 请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能 与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检 查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测 器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷 伦科技公司联系。在中国，请拨打 800 820 3278 。  什么原因导致基线毛刺？ 这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌 消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如 果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要 更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。在中国，请拨打 800 820 3278 。  什么原因导致基线波动？ 基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温 及湿度稳定，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管进行 隔热保温。  我的色谱图上的峰有拖尾现象。如何改善峰形？ 可能的原因： 1. 系统内的死体积大 2. 样品在色谱柱上有吸附 3. 色谱柱适用时间很长 建议用户： 1. 尽量减少流动相管线的死体积，确保管线接头的 连接合适减小死体积，由于不同生产厂家的管线的接头和密封垫 圈有可能不一样，尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。 2. 使用洗脱更强的流动相 3. 更换新色谱柱  如何排除流动相中的气泡？如何排出流动池中的气泡？ 避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行 脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进 行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中 的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流 动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡，则先摘下色 谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以 较大的流速注入流动池。 直到基线上看不到毛刺为止。气泡就 应该清除掉了。  把甲苯（toluene）用作衡量GPC 色谱柱效率的标准是否恰当？ 是的，比较恰当。如果选择这种评估标准，小分子甲苯不会与填 料发生相互作用，但是会扩散到GPC色谱柱填料的所有细孔中。 通过这种实验，能够通过洗脱峰宽度评定填料微粒大小以及柱床 填充效果如何。 这些是衡量效率时需要了解的内容。 大多数制造商通常推荐用这个样品来实验这些色谱柱的效率。 还能通过其它标准来确定GPC色谱柱的其它特征，例如排斥体 积。  HPLC 色谱中的峰板（peak plate）有什么作用？ 这些峰板（peak plate）可以让您比较不同色谱柱的效率，衡量 方法是对比色谱图中的峰宽和保留的峰宽。 一般而言，对于相 同的保留时间，峰越窄，色谱柱的效率越高，效率越高，色谱柱 就有越多的峰板（peak plate）。HPLC 仪器一般通过测量峰 宽（通常是半高）来确定色谱板或效率，采用的公式如下： N = efficiency = plates = 5.5