体内药物分析方法的建立与验证.pptVIP

* 体内药物分析 * 3. 伍用药物的干扰 TDM 时 ——还要考虑患者可能同时服用药物(通常为数有限)的干扰 比较——待测药物及可能同时服用药物的模拟生物样品的检测信号 ——如HPLC色谱峰的 tR、n 和 T 是否一致 确证——同时服用药物对分析方法的干扰情况 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第29页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 4. 与参比方法的相关性 除上述方法外，有时还可使用参比方法对照 参比方法一般选用特异性强、准确度高、线性关系良好的色谱法 ——如在TDM中使用UV(或RIA)时, 可以HPLC(或GC)为参比 参比方法测定结果为横坐标(X); 拟定方法结果为纵坐标(Y) 用最小二乘法计算回归方程 Y＝a＋bX (坐标标度相等) 相关系数(r)——表示两种方法测得结果的一致性 ——若 r ≠1，表示拟定方法为非线性，如 RIA 中抗血清滴度选择不当 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第30页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 4. 与参比方法的相关性 Y＝a＋bX 截距(a) ——表示拟定方法受到恒定干扰的程度——内源性物质(UV) 斜率(b) ——表示拟定方法受到比例干扰的程度——标记抗原不纯(RIA) 与参比方法的相关性比较——除显示分析方法的特异性外 ——斜率b表示两种方法测得结果的一致性 若参比方法准确度良好 ——若截距a≈0, 则拟定方法的准确度(回收率)为100b(%) 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第31页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 二、标准曲线与线性范围 标准曲线（standard curve）—— calibration curve or working curve ——生物样品中所测定药物浓度与响应的相关性（比例的程度） ——通常用回归分析方法所得的回归方程来评价 ——除少数方法（免疫分析法）外，标准曲线通常为线性模式 ——回归分析法为最小二乘法（least squares） 或加权最小二乘法（weighted least squares） 线性范围（linear rang）——标准曲线的最高与最低浓度的区间 ——模拟生物样品的测定结果应达到试验要求的精密度和准确度 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第32页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 二、标准曲线与线性范围(续) 标准曲线——用模拟生物样品建立 ——线性范围(不包括零点)应能覆盖全部生物样品中的药物浓度 ——不能使用外推的方法求算未知生物样品中的药物浓度 建立标准曲线所使用的模拟生物样品 ——应使用与待测的含药生物样品相同的生物基质制备 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第33页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 标准曲线的一般建立方法 1. 标准系列溶液(非生物基质溶液)的制备 溶剂——水或甲醇（或其他适当溶剂） 浓度——标准模拟生物样品中药物浓度的 50倍以上 加入量为生物样品总体积的 2%以下 避免标准模拟生物样品与实际样品存在较大差异 浓度较低——应除去溶剂后再加入生物基质 否则,在实际样品测定时应加入等体积的溶剂并涡旋混匀 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第34页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 2. 标准系列溶液的浓度范围 至少含5～8个浓度点(不包括零点,即空白) ——可覆盖全部待测生物样品中的药物浓度 如：1、2、5、10、20、50、100(等比梯度模式—比例常数约为 2) 若体内平均达峰浓度为50，其1/20为2.5 设定最高浓度为100，最低浓度为1 (个体差异) 实际制备时：500、250、100、50、20、10 …… 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 第35页，共70页，2022年，5月20日，22点52分，星期日 * 体内药物分析 * 3. 标准系列模拟生物样品的制备 空白生物基质(如血浆)——加入标准系列溶液适量，涡旋混匀 为防止在标准溶液加入及涡旋混合时造成的损失 ——①先加入标准溶液