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Waters高效液相色谱操作说明 一． 简介 本高效液相色谱实验包括：waters1525 泵+waters2487 双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相 二． 操作流程 0.准备工作 1 确定色谱实验方法，处理好流动相 ，换好流动相，确定色谱柱选择无误 1.开机 打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。检测器进入预热阶 段（此时检测器面板进入5mi 倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统， 待检测器自检完毕（整个自检过程约 6~7mi ），打开电脑桌面的 （Breeze软 件）。待程序完全启动，整个开机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。 2.建立新方法和新方案 2.1新建方案 方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。 2.1.1创建步骤 选择 →单击 →单击next→在project name中输入方案 名称（如abc），comments中可填注释，也可不填。→单击finish 2.1.2打开创建的方案 在 界面下→单击 →在project中找到你创建的方案（如 abc）→点击OK,即进入到我们自己的方案中了 2.2新建方法 在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方式， 检测波长等参数。 2.2.1新建方法步骤 单击 →单击 →单击 （Flow选项卡）→在 programmed flow 中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击 →单击 （channel 1 选项 卡）→在wavelength框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm 等等）→（设定结 束，保存）：单击 →输入方法名称如（abc 1 ）→单击save3 2.2.2 洗脱方式的设定（重要） 在programmed flow 中可看到 。其中Isocratic 为等度洗 脱，Gradient 为梯度洗脱。以下我们来分述。 2.2.2.1 若你用等度时（Isocratic）：pump mode中选择Isocratic 表格中Isocratic Flow A为流动相A 的流速,Isocratic Flow B为流动相B 的流速，Total Flow 为总流速。 例如：假设方法要求用乙腈做A 相，用纯水做B 相，乙腈占70%，水占30%，等度，则： 2.2.2.2 若你用梯度时（Gradient）：pump mode中选择Gradient 表格中第1 行默认已有，单击下面空白行处添加新行。 Time为时间，即此行开始时间；Flow不作更改，保持1ml/min 的总流速； %A 处填A 相比例；%B 处填B 相比例；curve 处为曲线型号，一般不变。 例如：假设用方法要求乙腈做A 相，用纯水做B 相，0—10min 乙腈从100%到50%；10—30min 乙腈从50%到40% ；30—60min 乙腈从40%到80%；则： 洗脱设置完毕继续按照2.2.1完成方案的创建。 3.洗泵和平衡 方法设定完毕，我们还要进行洗泵与平衡两项工作，让机器做好进样前的准备。 3.1洗泵 在更换流动相，第一次使用机器，长时间未使用的情况下需要进行洗泵的工作。步骤 如下：单击 （purge pump）→next→按指示图操作：打开泵面板，取塑料注射器， 扭开排液阀旋钮，用注射器抽取泵中液体10ml左右 （无气泡即可），反向扭紧旋钮，取出注 射器。根据需要灌洗AB泵。单击next→按图示操作：向左打开参比阀，单击next→（即 是对AB 泵以默认的 5mi/min 的流速进行冲洗，若只充