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无菌检查验证方案 编制： 日期： 审核： 日期： 批准： 日期： 文件编号： 文件受控： XXXX 有限公司 年 月 日 无菌检查验证方案 验证方案： 一．验证目的： 确认供试品所采用的检查方法和检查条件下无抑菌作用，以保证微生物的充分检出，确保检验方法科学性、检验结果准确性。 二．.验证依据： GB/T14233.2—2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第 2 部分：生物学试验方法 《中国药典》2010 版三．.验证频次： 检验条件发生改变时、检验方法发生改变时、检验人员发生改变时、进行再验证，如果一切都没发生改变时一年进行一次。 四．职责： 生产技术部制定验证方案。 质量部按照验证方案执行。五．.验证小组成员： 组长： 组员： 六．实施日期： 七.资料保存：由质管科保存 5 年。八．.检验方法： 无菌室消毒： 如果无菌室很久没有使用，在使用之前用乳酸或甲醛消毒，正常使用化验室的情况下，每月要消毒一次，使用六个月要更换消毒剂，按消毒剂的说明书的浓度、时间、方法进行消毒，化验员对地面进行消毒清擦，工作台面用 75%的酒精进行消毒，在化验员进入之前，紫外线照射 30min,在开启空调 30min。 化验员进入化验室过程： 化验员在一更除去外衣进入洁净间进行洗手间洗手、手消毒、穿洁净工作服， 进入二更、缓冲间、进入准备间，在准备间穿无菌工作服进入菌检室。 主要设备： 超净工作台，光学显微镜、恒温培养箱、恒温水浴箱、压力蒸汽灭菌器、电热干燥箱。 培养基配制及灭菌、器具灭菌. ①营养肉汤培养基的制备及灭菌，按照说明书制备培养基及灭菌。 ②流体硫乙醇酸盐培养基制备及灭菌，按照说明书制备及灭菌。 ③改良马丁培养基制备及灭菌，按照说明书制备及灭菌。 ④接触的器具采用可靠的灭菌方法，置压力蒸汽灭菌器内 121℃，30 分钟，或置于电热干燥箱里 180℃，2 小时。 无菌室检查： 直径为 9 厘米培养皿，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约 15 mL --20mL,在 30℃--35℃培养 48 小时，3 只培养基在无菌室操作台平均位置打开盖， 暴露 30 分钟后盖好盖，倒置 30℃---35℃培养 48 小时后取出检查，3 只培养基上生长的菌落数平均应不超过 1 个。 6.培养基无菌检查： 6.培养基无菌检查： 每批培养基随机抽取不少于 每批培养基随机抽取不少于 10 只，5 支置于 30℃---35℃，另取 5 支置于 20℃---25℃培养 14 天，均应无菌生长。检查可在供试品无菌检查前或和供试品的无菌检查同时进行。 培养基的灵敏度检查 培养基灵敏度检查用菌株传代次数不得超过 5 代，试验用枯草芽孢杆菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。 ⑴菌液制备：接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中（或营养琼脂培养基上）在 30°C--35°C 培养 18 小时至 24 小时，培养物用 0.9%氯化钠溶液，每 1ml 含菌数小于 100cfu 的菌悬液，菌悬液在室温下放置 2 小时内使用。 ⑵培养基接种：取 3 支管，每管装 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基，其中 2 管接种小于 100cfu 枯草芽孢杆菌，另 1 支管做空白对照液，置 30°C---35°C 培养 3 天，结果判定，空白对照管应无菌生长，加菌的培养基均生长良好，判该营养基的灵敏度检查符合规定。 无菌检查： 将灭好的生物指示剂用无菌操作法，将其放入装有 10ml 营养肉汤培养基的试管中，每个生物指示剂放入一个试管中，其中有一试管的培养基作空白对照液， 再取一试管营养肉汤培养基放入没灭菌的枯草杆菌芽孢菌片，作为阳性对照，置入 33°C-37°C 培养 7 天，逐日观察，并记录是否有菌生长。 如果加灭好生物指示剂在培养过程中，培养基出现浑浊，不能从外观上判断有无菌生长，可取该培养液适量转种至新鲜的营养肉汤培养基中及营养琼脂斜面上33°C-37°C 培养 2 天，观察是否有菌生长或取培养（物）涂片，染色，镜检，判断是否有菌，必要时作菌种鉴定。 结果判断： 阳性对照管的菌应生长良好，阴性对照管不得有菌生长，否则，试验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判定供试品符合规定。若供 试品管中任何一管浑浊并证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试 验结果无效，即生长的微生物非供试品所含，试验若经确认无效，应重试。 重试的过程： ①产品数量：同一批号 10 支单位产品。 ②浸提介质：质量浓度 9g/L 无菌氯化钠。 ③供试液制备： 管类器具：按管内表面积每 10cm2 加入提介质 1ml，振摇数次，流量约为10ml/min, 容器类器具：按容器内表面积每 10cm2 加入提介质 1ml，振摇数次。 ④培养基的无菌检查：每批培养