乙肝血清标志物检测.pptVIP

ELISA的基本原理 利用抗原和抗体特异性结合 主要的试剂 固相抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物 第三十一页，共四十九页，2022年，8月28日 ELISA的主要方法 间接法: 测定抗-HBs 夹心法：测定HBsAg和HBeAg 竞争法：测定抗-HBc 中和法：测定抗-HBe 捕捉法：测定抗-HBc IgM 第三十二页，共四十九页，2022年，8月28日 病原学诊断(二)—核酸检测 核酸杂交 探针 PCR 引物 第三十三页，共四十九页，2022年，8月28日 各项HBV血清标志物的解释 HBsAg –HBV感染的标志,可能是急性或慢性 Anti-HBs – 既往感染自然免疫/接种疫苗产生 Anti-HBc IgM – 急性HBV感染标志 Anti-HBc IgG – 既往或慢性HBV感染 HBeAg – 病毒复制活跃，具有高度传染性 Anti-HBe –慢性感染,病毒不再复制,低传染性 HBV-DNA – 直接测定病毒复制状态，比HBeAg更准确；临床主要用于监测治疗反应 第三十四页，共四十九页，2022年，8月28日 为什么要开展乙肝“两对半”定量检测 乙型病毒性肝炎是世界性的传染病，严重地威胁着人类的健康。我国是乙型病毒性肝炎高发病国家。据统计全世界无症状携带者（HBsAg携带者）超过2.8亿，我国占1亿以上，且多数无症状。所以乙肝的早期诊断对控制传染源、降低发病率及疾病的治疗均具有很重要的意义。酶标（ELISA）检测始于20世纪80年代中期，它对乙肝“两对半”定性测定在疾病的诊断，病情监测，疗效观察起到了一定的作用，但酶标检测HbsAg灵敏度较低，不能真正意义上定量测定血清中HbsAg含量。随着临床医学的发展，定性检测已经远远不能满足临床及患者的要求。化学发光免疫分析定量测定乙肝“两对半”大大弥补了酶标定性测定及灵敏度低的不足。 第三十五页，共四十九页，2022年，8月28日 血清学检测的临床意义 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 急性或慢性感染(大三阳) + - + - + + + + 乙肝后期或慢性感染(小三阳) - - + + - - - 潜伏期或急性乙肝早期 - - + + + 痊愈或恢复期,有免疫力 - - - - - + + + - - 痊愈,有免疫力 疫苗接种或曾经感染过,有免疫力 第三十六页，共四十九页，2022年，8月28日 血清学检测的临床意义 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 血清学检测的临床意义 血清学检测的临床意义 急性或慢性感染(传染性弱) + - - - + - + + 急性乙肝恢复期或既往感染 - - - - - - + 急性窗口期或既往感染康复期 - - - - - 未感染过 HBV + + - - + + + - - + 急性感染趋向恢复;慢性携带者 HBV感染已恢复,有免疫力 第三十七页，共四十九页，2022年，8月28日 Symptoms HBeAg anti-HBe Total anti-HBc IgM anti-HBc anti-HBs HBsAg 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100 Acute HBV Infection with Recovery Typical Serologic Course Weeks after Exposure Titre 第三十八页，共四十九页，2022年，8月28日 IgM anti-HBc Total anti-HBc HBsAg Acute (6 months) HBeAg Chronic (Years) anti-HBe 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Years Weeks after Exposure Titre Progression to Chronic HBV Infection Typical Serologic Course 小结 第三十九页，共四十九页，2022年，8月28日 乙肝五项检测的影响因素 1. 样本采集与处理的影响1.1标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。1.2塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。1.3标本凝固不全 ，正常血液采集后1/2~2h开始