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过氧化物酶过氧化物酶复合物法PAP法
过氧化物酶过氧化物酶复合物法PAP法
过氧化物酶过氧化物酶复合物法PAP法
过氧化物酶-过氧化物酶复合物法（PAP法）
原理：PAP法的基本源理与酶桥法相同，可是用酶和抗系统成的免疫复合物（PAP）代替了酶桥法中的抗酶抗体和随后联合的酶，把两个步骤归并为一个步骤。
优点：敏感性比间接法高
20倍。
缺点：理论上PAP是一种复合物，因其不是抗HRP抗
体，不能够与HRP联合，不会造成背景染色，但在实质工作中
仍存在比较重的非特异性背景染色。
基本染色方法：
（1）组织切片脱蜡至水。
（2）用0.3%HO
-甲醇在室温中办理切片
5～30分钟。
2
2
（3）充分水洗后，PBS洗5分钟×2次。
（4）1：20稀释正常血清，室温30分钟。
5）滴加一抗（兔），4℃中反响13～24小时。
6）PBS洗5分钟×2次。
7）加羊抗兔IgG，室温30分钟，PBS洗5分钟×2
次。
8）加PAP，室温30分钟，PBS洗5分钟×2次。
9）用DAB显色5～30分钟。
10）苏木素衬染、脱水、透明、中性树胶封固。免疫组化的方法好多，新方法层见迭出，如二步法，要不断
更新，与时俱进。诚然这些方法各有其特色，但总的来说，只需应用适合均可获得较为满意的结果。方法的选择其实不是影响免疫组化结果的主要因素。问题在于一个单位应常例地、固定地使用一种方法，不宜交替使用不相同的方法或经常改换方法。一旦选定一种方法，应务必使其标准化，力求使一抗、二抗、标记试剂和底物的浓度、孵育时间和浓度、缓冲液的使用程序化、规范化。
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