猕猴桃病毒鉴定技术规程.pdfVIP

DB6111/T 172—2021 猕猴桃病毒鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了猕猴桃病毒鉴定技术的术语和定义、检测对象、取样部位、抽样、鉴定方法和判定规 则。 本文件适用于杨凌示范区猕猴桃母本树、猕猴桃苗木的病毒鉴定。环境相似的猕猴桃产区可参照执 行。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猕猴桃母本树 stock plant of kiwifruit 提供猕猴桃种条或建外植体所需要幼嫩枝条的猕猴桃母株。 3.2 猕猴桃苗木 Kiwifruit seedling 经扦插、嫁接、组培等方式繁育的猕猴桃种苗。 3.3 逆转录-聚合酶链式反应 Reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） 提取猕猴桃检材的总RNA，以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为 模板进行聚合酶链式反应。 4 检测对象 猕猴桃主要病毒： a) 猕猴桃病毒A （Actinidia virus A, AcVA）； b) 猕猴桃病毒B （Actinidia virus B，AcVB）； c) 猕猴桃病毒C （Actinidia virus C，AcVC）； d) 猕猴桃褪绿环斑相关病毒 （Actinidia chlorotic ringspot-associated virus, AcCRaV）； 1 DB6111/T 172—2021 e) 黄瓜花叶病毒 （cucumber mosaic virus, CMV）； f) 苹果茎沟病毒 （apple stem grooving virus, ASGV）； g) 马铃薯X病毒 （potato virus X, PVX）； h) 柑橘叶斑驳病毒 （citrus leaf blotch virus，CLBV）； i) 猕猴桃病毒1 （Actinidia virus 1，AcV-1）； j) 猕猴桃褪绿环斑病毒(Actinidia yellowing ringspot virus, AYRSpV）； k) 猕猴桃黄化病毒1 （Actinidia yellowing virus 1, AcYV1）； l) 猕猴桃黄化病毒2 （Actinidia yellowing virus 2, AcYV2）； m) 猕猴桃种传潜隐病毒 （Actinidia seed-borne latent virus, ASbLV)。 4.1 抽样 4.1.1 猴桃母本树 每株均需检测。 4.1.2 出圃苗木 采用5点取样法随机抽取。1万株以内抽检100株 （含1万株）；1万株～10万株 （含10万株），首个1 万株抽100株，之后每增加1万株增检50株，不足1万株按1万株计；超过10万株，第1万～10万株按上述 方法抽样，之后每增加1万株增检20株，不足1万株按1万株计。 5 取样部位 生长季节取幼嫩叶片放置于自封袋内，4 ℃保存不超过24h或放置于-80 ℃长期保存备用；休眠季 节剪下枝条，撕开表皮用小刀刮取1 g左右韧皮部组织，立即使用或放置于-80 ℃保存备用。 6 鉴定方法 6.1 双抗体夹心酶联免疫法 （DAS-ELISA法） 详见附录A。 6.2 逆转录-聚合酶链式反应法 （RT-PCR法） 详见附录B。 7 判定规则 酶联免疫检测或RT-PCR检测呈阳性反应的判定为携带病毒。脱毒母本树带毒率为0、出圃苗木带毒 率≤3.0%判定为合格苗木。 2 DB6111/T 172—2021 AA