器官移植配型.pptVIP

第一页，共二十二页，2022年，8月28日 基本概念 广义的器官移植：用自身或异体的正常器官、组织或细胞置换病变或功能缺失的器官、组织或细胞，以维持和重建机体的生理功能。 影响移植成功的关键因素是可能发生的免疫排斥反应； 第二页，共二十二页，2022年，8月28日 一. 基本概念 人 人 猪 相关概念 同种异体移植 异种移植 同系移植 移植 自体移植 第三页，共二十二页，2022年，8月28日 引起排斥反应的抗原 ABO血型抗原； 组织特异性抗原； 主要组织相容性抗原(MHA, major histocompatibility antigen )，又称人类白细胞抗原（HLA）; 次要组织相容性抗原（mHA, minor histocompatibility antigen ）H-Y抗原; 第四页，共二十二页，2022年，8月28日 HLA的基因结构、抗原结构及特点 由第6号染色体短臂21.31区编码，按功能分为HLA-I,Ⅱ,Ⅲ三个区域，其中I,Ⅱ区编码抗原与移植关系密切。 HLA-I类抗原主要由A、B、C位点编码； HLA-Ⅱ类抗原由DR、DP、DQ位点编码； 第五页，共二十二页，2022年，8月28日 HLA-I类抗原是由第6号染色体相应I类基因编码的α链与第15号染色体编码的β2微球蛋白非共价键结合的糖蛋白，主要表达在有核细胞表面； HLA-Ⅱ类抗原由第6号染色体相应Ⅱ类基因编码的α链和β链非共价键结合的糖蛋白，主要表达在抗原递呈细胞，胸腺上皮细胞表面； 第六页，共二十二页，2022年，8月28日 HLA抗原的生物学功能 1.参与蛋白质抗原的处理与递呈； 2.调节免疫应答； 3.参与T细胞分化过程； 4.介导同种免疫应答； 第七页，共二十二页，2022年，8月28日 HLA基因的遗传特点 1.高度多态性；HLA基因呈现多位点复等位的特点； 2.共显性遗传：每对等位基因同时表达； 3.单倍型遗传：位于同一条染色体上的 HLA各位点的基因组合； 4.连锁不平衡：单倍型基因非随机分布的现象； 第八页，共二十二页，2022年，8月28日 2.传统的HLA分型技术 血清学分型:补体依赖的细胞毒实验; 待测淋巴细胞与已知抗体孵育，再加入补体，若该抗体与淋巴细胞膜上HLA分子相匹配，则激活补体系统导致待测细胞膜的破坏，否则细胞膜完整不受影响。 局限性：需要活的淋巴细胞；存在交叉反应；隐蔽抗原无法识别；人为影响因素多质控难做； 第九页，共二十二页，2022年，8月28日 细胞学分型：混合淋巴细胞培养技术； 受者淋巴细胞与已知类型的淋巴细胞或者供者淋巴细胞混合培养，两种细胞HLA分子表型如果相同则不能刺激淋巴细胞增殖，反之则刺激淋巴细胞增殖，分为单双向两种类型。 局限性：需要活的纯合子表型的淋巴细胞；增殖检测方法要用到同位素； 第十页，共二十二页，2022年，8月28日 分子生物学技术分型 HLA抗原蛋白分子的多态性取决于相应编码基因的多态性； RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP; PCR-SSCP; PCR-Sequencing； PCR-SSO/基因芯片技术； 流式细胞仪技术； 氨基酸残基配型标准分析技术； 第十一页，共二十二页，2022年，8月28日 聚合酶链反应（PCR） 在多聚合酶，引物，底物和模板的参与下通过变性，退火，延伸三个循环步骤在短时间内达到对目的片断的大量扩增，是基因 分型的基础。 第十二页，共二十二页，2022年，8月28日 RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP/基因组DNA 提取 酶切 电泳分析（RFLP）  DNA 扩增（共性引物/特异性引物）  (限制性内切酶酶切)  电泳检测(PCR-RFLP/PCR-SSP) 第十三页，共二十二页，2022年，8月28日 PCR-SSCP（单链构象多态性） 提取基因组DNA PCR扩增（特异引物） 变性(双链 单链) 聚丙烯酰胺凝胶电泳 根据带型可检出基因的多态性又可检出点突变，有利于发现新的等位基因 第十四页，共二十二页，2022年，8月28日 PCR-sequencing 提取基因组DNA PCR扩增（非特异/特异引物）DNA测序 最可靠、直接、准确的HLA分型方法； 临床上应用限制了供体的来源； 在确定等位基因的多态性、发现新位点、基因定位等研究领域应用较多； 第十五页，共二十二页，2022年，8月28日 PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针杂交）/基因芯片技术 正向杂交：提取基因组DNA PCR扩增（共性引物） 将PCR产物固定在固相支持载体上并进行变性