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- 2022-11-15 发布于江苏
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实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
1. 巴比妥缓冲液(pH8.6,0.07mol/L,离子强度0.06)
称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g,加500毫升蒸馏水,加热溶解。待冷至室温后,再加蒸馏水至1000毫升。
2. 氨基黑10B染色液
称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀,加蒸馏水至100ml。
3. 漂洗液
甲醇45ml、冰醋酸5ml,混匀后加蒸馏水至100ml。
4. 洗脱液 0.4mol/LNaOH溶液。
5. 透明液
称取柠檬酸21g,N-甲基-2-吡咯烷酮150g,以蒸馏水溶解并稀释至500ml。
【操作】
1. 准备
将缓冲液加入电泳槽的两槽内,并使两侧的液面等高。裁剪尺寸合适的滤纸条,叠成四层贴在电泳槽的两侧支架上,一端与支架前沿对齐,另一端侵入电泳槽的缓冲液内,使滤纸全部湿润,此即 “滤纸桥”(图3-1)。
将醋酸纤维素薄膜切成2cm×8cm大小,在无光泽面的一端约1.5cm处,用铅笔轻划一直线,作为点样位置。然后将无光泽面向下,置于盛有巴比妥缓冲液的培养皿中浸泡,待充分浸透(约20分钟)即无白色斑点后取出,用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液。
2. 点样
取少量血清于玻璃板上,用加样器取少量血清(约2~3μl),加在点样线上,待血清渗入膜内,
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