pgex4t1原核表达载体的构建.docxVIP

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3 pGEX-4T-CCL5原核表达载体的构建 摘 要:原核表达载体的构建是很多生物实验的基础和必备工作,pGEX-4T-1是一种常用的表达载体。本项目旨 在构建pGEX-4T-CCL5原核表达载体,为CCL5融合蛋白的纯化、CCL5单克隆抗体的制备提供材料。首先,运用PCR技术 体外扩增了CCL5基因, 并用BamH I、Xho I双酶切pGEX-4T-1载体。然后,将CCL5胶回收片段与pGEX-4T-1双酶切胶回 收片段连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并涂布在含有Amp的培养基上,在37℃条件下培养12h。最后挑选克隆进 行菌落PCR、双酶切鉴定及测序分析。菌落PCR、双酶切鉴定及

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