谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐的测定 液相色谱-电感耦合等离子体质谱联法.pdfVIP

T/SSX 002—2022 谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐的测定 液相色谱－电感耦合等离子体质谱用法 1 范围 本文件规定了液相色谱－电感耦合等离子体质谱联用法测定谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐 含量的方法。 本文件适用于大米和小麦中硒代蛋氨酸、亚硒酸盐和硒酸盐的测定；玉米中硒代蛋氨酸和硒酸盐的 测定。 当样品称样量为0.3g，提取液体积为5mL时，硒代蛋氨酸方法定量限为0.015mg/kg、硒酸盐方法 定量限为0.010mg/kg、亚硒酸盐方法定量限为0.007mg/kg。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 方法原理 试样中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐通过蛋白酶酶解后，经离子交换色谱柱分离，电感耦合等离 子体质谱仪测定，以色谱保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，本法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682 规定的一级水。 4.1 试剂 磷酸氢二铵 （(NH ) HPO ）。 4.1.1 4 2 4 4.1.2 蛋白酶XIV：生化试剂 （酶活力≥3.5U/mg 固体）。 4.1.3 甲酸 （HCOOH）：色谱纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 甲酸溶液 （10%，v/v）：准确量取 10mL 甲酸，缓慢加水稀释至 100mL，混匀。 4.2.2 流动相配制 （40mmol/L 磷酸氢二铵溶液，pH 6.0）：称取2.6412g 磷酸氢二铵，用水稀释至 500mL，用甲酸溶液 （4.2.1）调节pH 值至6.0，混匀，于超声水浴中超声脱气 10min，备用，临用现配。 4.3 标准品 4.3.1 硒代蛋氨酸 （C H NO Se，CAS 号：9001-05-2），纯度≥98%。 5 11 2 4.3.2 硒酸钠 （Na O Se，CAS 号：13410-01-0），纯度≥99% 2 4 4.3.3 亚硒酸钠 （Na O Se，CAS 号：10102-18-8），纯度≥99% 2 3 4.4 标准溶液 4.4.1 硒代蛋氨酸标准溶液 （1.0mg/mL，以Se 计）：准确称取 0.2480g 硒代蛋氨酸标准品，用水 溶解并定容至 100mL，配制成 1.0mg/mL 硒代蛋氨酸标准溶液，2 ℃～8℃避光保存，保存期 6 个 月。或购买国家有证硒代蛋氨酸溶液标准物质 （C H NO Se，GBW 10034）。 5 11 2 1 T/SSX 002—2022 4.4.2 硒酸根标准溶液 （1.0mg/mL，以 Se 计）：准确称取 0.2393g 硒酸钠标准品，用水溶解并定 容至 100mL，配制成 1.0mg/mL 硒酸根标准溶液，2 ℃～8℃避光保存，保存期 6 个月。或购买国 2- 家有证硒酸根溶液标准物质 （SeO4 ，GBW 10033）。 4.4.3 亚硒酸根标准溶液 （1.0mg/mL，以 Se 计）：准确称取 0.2190g 亚硒酸钠标准品，用水溶解 并定容至 100mL，配制成 1.0mg/mL 亚硒酸根标准溶液，2 ℃～8℃避光保存，保存期 6 个月。或 2- 购买国家有证亚硒酸根溶液标准物质 （SeO3 ，GBW 10032）。 4.4.4 单标准储备溶液 （10.0 μg/mL，以 Se 计）：分别吸取一定量的硒代蛋氨酸标准溶液 （4.4.1）、 硒酸根标准溶液 （4.4.2）、亚硒酸根标准溶液 （4.4.3），用水逐级稀释配制成 10.0 μg/mL 的单标准储 备溶液，2 ℃～8℃避光保存，保存期 6 个月。 4.4.5 混合标准系列溶液：分别准确吸取 1.0mL 浓度为 10.0 μg/mL 的硒代蛋氨酸、硒酸根、亚硒