发酵补中益气汤制剂的研发与应用.pdfVIP

摘 要 随着畜牧养殖业的快速发展，动物疫病、药物残留、耐药性等系列问题愈发受到 关注。如何提高畜禽产品质量，减少抗生素使用，寻找抗生素新的替代产品是目前养 殖业亟待解决的问题。发酵复方中药兼具中药和益生菌的优点，具有抗菌、抗病毒、 抗内毒素的作用，能提高机体免疫力，有望成为抗生素的替代品，但其作用效果及其 作用机制还有待深入研究。补中益气汤出自李东垣的 《脾胃论》，具有补益脾胃，升 阳举陷的功效，加减补中益气汤在临床上得到广泛应用。许多国内外学者试验证明补 中益气汤具有抗肿瘤，抗感染，增强机体免疫的作用。本研究通过优化发酵条件成功 研制了一种发酵补中益气汤制剂，并研究了该制剂对鸡免疫功能和生长性能的影响。 研究结果如下： 1.补中益气汤发酵条件的优化 本试验将中药名方补中益气汤水煎剂进行发酵，采用平板计数法、硫酸-苯酚法、 高效液相色谱法等技术研究枯草芽孢杆菌在补中益气汤的最佳发酵条件，补中益气汤 发酵前后多糖含量变化以及成分分析。结果表明，枯草芽孢杆菌发酵补中益气汤的最 佳条件为：发酵温度37℃，100mL 补中益气汤水煎剂中添加枯草芽孢杆菌1.0×109 CFU，发酵4 d；发酵液中多糖含量显著升高；补中益气汤发酵前后主要成分保留时 间未见明显变化，但吸收峰峰高发生了较大的变化，说明发酵前后主要成分变化不明 显，但主要成分含量及其相对比例发生了变化。 2.发酵补中益气汤制剂对鸡免疫功能的影响试验 150 SPF A B C D E 5 7 将 只 鸡随机平均分为 、 、 、 、 组， 日龄各组分别按照高、 中、低剂量拌料饲喂发酵补中益气汤制剂、补中益气汤水煎剂，E 组作为空白对照组。 14 日龄免疫新城疫-禽流感油苗和新城疫IV 系疫苗。免疫后7、14、21、28d 分别采 血分离血清，采用HA-HI 方法、ELISA 试剂盒、流式细胞仪等检测试验鸡免疫指标 变化。免疫后28d，剖杀试验鸡只，采集空肠、胸腺、法氏囊、脾脏，采用组织学和 + 免疫组织化学技术，观察主要免疫器官组织形态学变化以及CD8 T 淋巴细胞分布。 结果显示，与空白对照组相比，发酵补中益气汤制剂各剂量组和补中益气汤水煎剂组 能够不同程度的提高血清中NDV、H9N2 亚型AIV 抗体效价、IL-2、IFN-γ水平、十 + + 二指肠中SIgA 水平，调节外周血中CD4 /CD8 T 淋巴细胞比值；与补中益气汤水煎 剂组相比，发酵补中益气汤制剂各剂量组能够不同程度地促进空肠的发育，使胸腺、 + 脾脏、法氏囊等免疫器官中CD8 T 淋巴细胞增多。试验结果表明，发酵补中益气汤 I 制剂、补中益气汤水煎剂都能不同程度地增强鸡的免疫功能，发酵补中益气汤制剂的 效果优于补中益气汤水煎剂，且与饲喂剂量呈正相关。 3.发酵补中益气汤制剂能提高鸡抗禽4 型腺病毒 （FAdV-4）感染的作用 将SPF 雏鸡60 只，随机平均分为A、B 两组，A 组为试验组、B 组为对照组。 7 A B 14 日龄开始， 组拌料饲喂发酵补中益气汤制剂， 组对照组，不喂药。 日龄分 别肌肉注射FAdV-4 （1000TCID / mL），剂量为0.2mL/只，进行人工感染试验。 50 结果表明，与对照组比较，发酵补中益气汤制剂组试验鸡的发病率 （30%）和死亡率 70% P<0.05 （ ）明显降低，且两组差异显著 （ ）。说明发酵补中益气汤制剂具有提高 鸡抗病毒感染的作用。 4.发酵补中益气汤制剂的临床应用效果试验 为验证发酵补中益气汤制剂的临床应用效果，选择聊城周边的两个肉鸡养鸡场和 一个蛋鸡场进行临床应用试验。试验组饲料中添加1%的发酵补中益