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一、一期止血缺陷筛查试验
1.出血时间(bleeding time,BT)
(1)原理:测定在皮肤受特定条件外伤后,出血自然停止所需的时间即为出血时间。
BT反映了毛细血管与血小板的相互作用,包括内皮下组织与血小板黏附(通过vWF的作用)、血小板的聚集和释放等反应,以及PGI2与TXA2的动态平衡。
(2)临床意义:出血时间延长见于血小板减少症;先天性血小板功能异常,如血小板无力症、血小板贮存池病;获得性血小板功能异常,如尿毒症、药物影响、异常蛋白血症、骨髓增生性疾病;血管性血友病;遗传性血管周围结缔组织病如艾-唐综合征。
一般凝血因子缺乏出血时间不延长,但某些严重的因子缺乏(如因子Ⅹ和Ⅺ)及无纤维蛋白原血症可以延长。
出血时间缩短见于某些严重的高凝状态和血栓性疾病。
此外,出血时间还广泛用于外科手术前的出血筛选和抗血小板药物的监控,以免发生出血。
(3)注意事项:试验前一周患者应停服阿司匹林、噻氯吡啶等抗血小板的药物。
2.束臂试验(tourniquet test或capillary fragility test,CFT)
(1)原理:通过前臂局部加压,使静脉血流受阻,给毛细血管以负荷,观察前臂皮肤一定范围内新出现的出血点数目,来估计血管壁的完整性及其脆性。
(2)临床意义:新出血点的数目超过正常为阳性,见于:
①血管壁结构和(或)功能缺陷,如遗传性出血性毛细血管扩张症、过敏性紫癜、单纯性紫癜及其他血管性紫癜。
②血小板的量和(或)质异常,如原发性和继发性血小板减少症、血小板增多症、先天性(遗传性)和获得性血小板功能缺陷症。
③血管性血友病(vWD)。
二、二期止血缺陷筛查试验
1.凝血酶原时间测定(prothrombin time,PT)
(1)原理:在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶(人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液)和钙离子,使凝血酶原变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需时间即凝血酶原时间。该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。
(2)参考值及报告方式
①直接报告患者及正常对照的PT秒数,参考值为11~14s。超过正常3s为异常。
②凝血酶原时间比值(prothrombin time ratio,PTR)=受检者PT(s)/正常对照PT(s)。宜用多份正常人血浆PT的几何均数,或其混合血浆的PT,参考值为1±0.15。
③国际标准化比值(international normalized ratio,INR),INR=PTRISI。
ISI:所用组织活酶的国际敏感度指数(international sensitivity index,ISI)
ISI是所用组织凝血活酶与ISI已知的国际参比品或经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数。
测定方法是用多份不同凝血因子水平的血浆(包括正常人和口服抗凝剂患者),用参比品测得它们PT的对数(logPT),再用待标定的组织凝血活酶测得它们的logPT,以前者为纵坐标,后者为横坐标作图。经回归求得直线斜率。则待标定的组织凝血活酶的ISI=已知ISI×斜率。ISI值越低,试剂对有关凝血因子降低的敏感性越高。
(3)临床意义
①PT延长见于遗传性外源凝血系统的因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纤维蛋白原减低,但均很少见。
②肝脏疾病:由于外源性凝血因子主要在肝脏合成,因而肝脏疾病时,PT延长。
③维生素K缺乏症:胆石症、胆道肿瘤、慢性肠炎、偏食、2~7月龄的新生儿以及长期服用广谱抗生素的患者等,由于维生素K吸收或合成障碍,导致肝脏合成异常的凝血酶原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等分子,PT延长。
④血液循环中抗凝物质增加,如肝素或FDP增多等。DIC和原发性纤溶时,由于FDP生成增加,FDP有较强的抗凝能力,故也使PT延长。
⑤用于香豆素类等口服抗凝剂的监控,一般认为以维持PT值在参考值的2倍左右(1.3~2.5倍)即25~30s,或PTR为1.3~1.5(最大不超过2),INR以2.0~3.0为宜。
⑥PT缩短见于口服避孕药、高凝状态和血栓性疾病等。
(4)注意事项:①HCT影响:不同患者HCT不同,导致血浆量多少不一,因此游离的Ca2+浓度不同,从而导致PT结果异常。对于HCT35%和55%的患者,采血量或抗凝剂用量按下述公式计算。采血量(ml)=抗凝剂用量(ml)×9×(1-0.45)/(1-HCT)。
②血浆标本离心:相对离心力1500×g、离心10分钟制备乏血小板血浆,若血浆中富含有血小板,PT将假性缩短。
③溶血、脂血标本:溶血时由于红细胞中有促凝成分,可使PT假性缩短;脂血干扰某些仪器检测过程中的浊度变化,因此会引起PT检测
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