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二辛可酸法实验报告 BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白 质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和 BCA试剂反应,使其由原来 的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm有强烈的光吸收，且吸光值 和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测 定。 原理：蛋白质中含有色氨酸与酪氨酸残基，这两种氨基酸残基具有吸收紫外 光的性质，它们的紫外光吸收谱峰值在280nm附近。某些蛋白质含有二硫 键，也会在280nm附近吸收紫外光。近紫外吸收法就是根据这个性质，对 蛋白质进行定量。因为不同的蛋白质中所含有的色氨酸与酪氨酸的数量存在 很大的差异，所以蛋白质在280nm处的吸光度4zso也存在非常大的差异。 比如，当蛋白质浓度为1mg/m 时，吸光度4pso可为0-4之间的任何值。 但是，大部分的蛋白质的吸光度A2so时0.5-1.5之间的某个值。该方法测 定蛋白质的浓度具有明显的优缺点。这种方法操作简单，测定完成后,样品 可以被回收，对buffer没有特殊要求，这是该方法的优点。该方法的缺点 是:其他的生色基团会影响蛋白质吸收光谱的测定，比如核酸在该波长的紫 外吸收能力非常强，少量的核酸就会对蛋白质吸光值的测定造成很大的干 扰。同时，不同的蛋白质的消光系数需要在实验前确定。蛋白质浓度的计算: 朗伯比尔定律：A(absorbance)=εcl,因此：c(mg/ml)=A/el(cm)。