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医学微生物学实验报告 微生物实验报告 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 年级专业 实验者 学号 组号 小组成员 指导老师 一、 实验目的 1. 了解细菌生长的基本营养条件以及培养基的种类。 2. 掌握培养基制备的原则和一般方法。 3. 掌握无菌操作技术。 4. 掌握病原菌的分离与培养方法。 5. 掌握油镜的正确使用。 6. 掌握细菌涂片标本的制备以及革兰氏染色法。 7. 熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 8. 掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 9.掌握纸片扩散法检测药物敏感性原理及应用。 10.掌握玻片凝集试验的原理方法、方法、结果观察与判断。 二、 实验器材 1．药品与试剂： 营养琼脂粉、营养肉汤粉、半固体琼脂粉、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、普通营养琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、斜面培养基管、液体培养基管、半固体培养基管、结晶紫染液（第1液）、卢戈氏碘液（第2液）、95%酒精（第3液）、稀释石炭酸复红（第4液）、香柏油、二甲苯、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、诊断血清、Muller-Hinton琼脂平板、青霉素滤纸片、链霉素滤纸片、庆大霉素滤纸片 2. 器材： 1500W电炉、天平、称量纸、药勺、三角烧瓶、量筒、试管、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、试管筐、尺、平皿、酒精灯、电炉、接种环、接种针、染色架、吸水纸、擦镜纸、打火机、笔、显微镜、小砂轮、载玻片、镊子、试管刷、冰箱、恒温培养箱 三、 方法与步骤 3、细菌的纯培养 斜面接种分工 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面 丁→ EMB平板→粉红菌落→1支斜面 方法：接种环→套住菌落→轻刮取菌→接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉 →条细菌接种线→再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线→细菌涂布接种在斜面培养基的表面 →斜面正面上2/3作标记：组号、颜色→收集平板-灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。 4、细菌的形态学检查 涂片→干燥→固定→染色 (1)涂片→干燥→固定 甲→黄色，紫黑。 乙→白色，粉红。 丙→黄色，紫黑。丁→白色，粉红。 方法：涂片：①接种环取盐水3ulX2滴，水滴间距小于2cm;②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混勻，涂成大于lcm2;③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。→干燥→固定：手持载玻片→端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2?3秒钟。 (2)革兰染色 涂片→干燥→固定→结晶紫→初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→ 95%乙醇→脱色约20秒钟—7尺洗—稀释品红—复染1分钟—水洗—吸干，镜检。 油镜使用方法：10X物镜—看清标本—滴加香柏油—100X油镜—浸泡油 中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油 —擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3)混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。 5、液体培养基接种（肉汤接种） 甲→黄色，乙→白色， 丙→紫黑，丁→粉红。 方法：（1)接种环斜面取菌，在靠近液面的管壁上，上下研磨接种；（2)在管壁上， 将接种环内的菌膜拍破。退出接种环，烧灼灭菌；（3)标记：组号，颜色 6、细菌的生化试验等 a.细菌的糖发酵试验 甲—紫黑菌苔—①葡萄糖 乙—紫黑菌苔—②乳糖 丙→粉红菌苔→③葡萄糖 丁→粉红菌苔→④乳糖 方法：①用砂轮在糖发酵管液面上方2?3cm处切割，然后，向切口外侧分离掰断，管 口烧灼灭菌。②接种针斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。③退出接种针， 烧灼灭菌。④管口朝向相同，放置在平皿内。 b.抗菌素敏感性试验 纸片扩散法 甲→黄色菌液 乙→白色菌液 丙→紫黑菌液 丁→粉红菌液 方法：①先取→环菌液；②沿平板直径拉一条细菌接种线；③再取一环菌液；④旋转 平板90度角，拉另一条接种线，使两条细菌接种线呈“十字形”；⑤然后在平板上半部，作 连续来回密集划线，每次划二分之一平板；⑥旋转平板90度角，二次密集划线；⑦旋转平 板90度角，三次密集划线；⑧旋转平板90度角，四次密集划线；⑨设三点，呈等边三角距离； ⑩点距离平板边缘约15mm;?作标记：青、先、庆；?镊子尖嘴朝下，夹取相应药物纸片 的边缘，平贴在已设定的位置上，轻轻按压纸片。 c.血浆凝固酶试验 兔血浆+黄色，白色 方法：①取二滴兔血浆(rabbit plasma)置于洁净的玻片上。②分别用接种环取白色和黄 色菌苔(约2?3个菌落的菌量)与血浆研磨混合成直径8?10mm的一层薄菌膜，立即观察结果。③菌液出现明显凝块者为阳性，否则为阴