重组克隆的筛选和鉴定讲义.pptVIP

（3）二抗结合 加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗掉。二抗只识别一抗。 二抗上联着一种酶（碱性磷酸酶、过氧化物酶、脲酶等）。 第九十四页，共一百七十一页。 二抗 第九十五页，共一百七十一页。 （4）显色反应 加入无色的底物，被二抗上所带的酶催化反应转变成有色物质（或发光）。 第九十六页，共一百七十一页。 第九十七页，共一百七十一页。 图 ELISA assay 第九十八页，共一百七十一页。 （5）比色 在特殊的分光光度仪（酶标仪）上比色，打印出结果。 第九十九页，共一百七十一页。 图 Safire多功能扫描型酶标仪 第一百页，共一百七十一页。 3.ELISA的局限性 有效，但准确性稍差（主要取决于一抗的特异性）。 必须与其他方法一起综合考虑。 最好用单克隆抗体（monoclonal antibody） 第一百零一页，共一百七十一页。 第一百零二页，共一百七十一页。 临床检验常用的单抗 第一百零三页，共一百七十一页。 四、免疫印迹法（western blotting） 在蛋白质凝胶电泳以后，用转膜和免疫的方法检测胶上的蛋白质泳带 第一百零四页，共一百七十一页。 1.原理 （1）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS） ① SDS 是蛋白质的变性剂，使煮沸变性的蛋白质维持线性状态，并与蛋白质结合，使蛋白质带上