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DNA重组技术的基本工具 武陟一中 谢则华 第一页，共二十七页。 烟草 　　中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100% 能产生狂犬病抗体蛋白的转基因 第二页，共二十七页。 每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。 　　1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本，提高了胰岛素的供应量。 治疗糖尿病特效药—— 据WTO调查： 2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。 胰岛素 第三页，共二十七页。 基因工程的产物 第四页，共二十七页。 定向基因改造设想 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 第五页，共二十七页。 基因工程的概念 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新生物类型和产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 第六页，共二十七页。 转基因技术实现了一种生物的某些性状 在另一种生物中表达。 普通棉花　　抗虫棉 第七页，共二十七页。 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 第八页，共二十七页。 关键步骤： 一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 二： 抗虫基因与载体DNA、棉花DNA“缝合” 三： 抗虫基因进入棉花细胞 第九页，共二十七页。 上述关键步骤需要哪些工具？ 一： “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 二： “分子缝合针”—— DNA连接酶 三： “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的 载体 第十页，共二十七页。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1 主要来源： 原核生物 2 种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。 粘质沙雷氏杆菌 （Serratia marcesens） SmaⅠ 大肠杆菌 （Escherichia coli R） EcoRⅠ 第十一页，共二十七页。 3 作用特点： 识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键 具有特异性。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 第十二页，共二十七页。 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 第十三页，共二十七页。 Go back 第十四页，共二十七页。 限制酶的识别序列： Go back 第十五页，共二十七页。 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 第十六页，共二十七页。 5.作用结果： 产生黏性末端或平末端 第十七页，共二十七页。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 第十八页，共二十七页。 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 Go back 第十九页，共二十七页。