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茎、叶中淀粉的测定 一、淀粉糖化酶——酸水解法 方法原理 上述用酸水解过程中半纤维素也被水解，使淀粉的测定结果产生正误差，这对于淀粉含量较 少而半纤维素含量较多的样品影响更大。所以，若需取得精确结果，最好采用酶水解法。用 淀粉酶水解淀粉可得准确的结果。因为淀粉酶有严格的选择性，它只水解淀粉而不水解其他 成分。酶将淀粉水解成麦芽糖及糊精，再经酸水解最后也都水解成葡萄糖。测定所得到的葡 萄糖量，就可计算淀粉含量。 质 主要仪器： 恒温箱。 试剂 液 （1）200gLNaOH 溶液。 （2）甲苯。 海 （3）淀粉酶 （Diastasum）。能使淀粉水解为麦芽糖，具有专一性，市售品可按说明书 使用 （通常糖化能力为1 ∶25 或1 ∶50），当使用温度超过85℃或有酸碱存在下将失去活性。 长期贮存后活性将要降低。经配制以后的酶溶液活性降低更快，应临用时配制，贮存于冰箱 上 保存，在使用前应对其糖化能力进行测定，以确定酶的用量。即用已知量可溶性淀粉，加不 同量的淀粉酶溶液，置55-60℃水浴中保温1h 后，用碘液检查是否存在淀粉，以确定酶的 质 活力，及水解样品时所需加入的酶量。 如无市售淀粉酶，可制取麦芽法代替。 液 制法取大麦粒200g，在水中浸泡12h，平铺于搪瓷盘中1cm 厚，保持一定湿度，令其 发芽数日至幼芽长约1cm，然后在25～35℃将麦芽及麦粒干燥并磨成粉，每100g 粉末加入 200g ·L 乙醇溶液200mL 浸泡24h，然后用细布压榨过滤，滤液中加双倍滤液量的乙醇进行 海 沉淀，沉淀经布氏漏斗抽滤后，再置乳钵中与乙醇一起研磨，再抽滤，沉淀用乙醇和乙醚洗 涤，最后在硫酸干燥器中干燥后备用。用时按淀粉酶相同方法，测定其糖化力。 上 （4）6mol ·L-1HCl。取浓HCl500mL 加水至1L。 （5）磷酸盐缓冲溶液。称取 Na2HPO4 .2H2O 11.876g 溶于 1L 水中。另称取 KH2PO4 9.079g 溶于另1L 水中。然后取Na2HPO4。溶液300mL 与KH2PO4 700mL 混合即可。质 （6）6mol ·L- NaOH。称取NaOH （三级）200g 溶解于水中，冷却后，稀释至1L。 液 操作步骤 称取风干磨细并通过60 目筛样品2.000～5.000g 置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用乙 海 醚50mL 分5 次洗除脂肪 （样品脂肪较少时，可不洗除），再用约850mL ·L 乙醇100mL 洗 去可溶性糖类 （*），将残留物移入250mL 三角瓶中，加少量冷水使样品湿润，迅速加入约 100mL 热水，并置于沸水浴中加热1h，使淀粉完全胶化。胶化时淀粉粒的外膜破裂，水能 上 透入淀粉粒的内部，这时淀粉溶解，淀胶膨胀，形成浆状溶液。 1h 后取出三角瓶，冷却至50~55℃，加入淀粉酶0.03～0.05g。此淀粉酶须事先加水3～ 5mL 用玻棒研磨，然后再加入，使它容易与溶液混合，否则淀粉酶干粉可能粘于三角瓶的内 壁，或在液面上形成小块，从而减弱了淀粉酶的作用。加入淀粉酶以后，立即加入磷酸盐缓 冲溶液10mL，甲苯5 滴，用软木塞塞紧，然后三角瓶置于45～55℃恒温箱中保温两昼夜或 更长。 保温二昼夜后，取出少量试液，放在载玻片上，加2 滴I2——KI