细胞培养的基本理论知识.pptVIP

* * ３）培养液的酸碱度对细胞生长的影响 大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。 体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力 ４）无污染、无毒（前提条件！） 组织培养常用术语 Cell culture (细胞培养) ：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长，称为细胞培养。在细胞培养中，细胞不再形成组织，但在实验室口语中，人们常将它扩展至组织培养与器官培养。 贴壁依赖性：为细胞需贴附于底物或支撑物上才能生长的性质。 Primary culture (原代培养)：从体内取出细胞或组织的第一次培养 Passage (传代或传代培养) 将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。 Suspension culture（悬浮培养） 细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖的一种培养方式。 Cell fusion （细胞融合）在体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使两个独立的细胞融合成一个细胞。 Confluent (汇合)：细胞相互连接成片占据所有底物面积。切勿与细胞融合相混淆。 Sub-confluent（近汇合）：细胞在底物上生长接近，但尚未完全汇合。 Cell line（细胞系）原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。如果不能继续传代或传代数有限,可称为有限细胞系，如可连续传代，则可称为连续细胞系 。 Clone (克隆)： 单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，它们的遗传特性相同。 Cell strain (细胞株) :从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。 Cell generation time(细胞一代时间) 单个细胞两次连续分裂的时间间隔。 population doubling time（群体倍增时间）:在对数生长期进行计算的细胞增加一倍所需的时间。 　　　　　　第二章 　　　组织培养设施和基本条件 细胞培养设施和基本条件 实验室设计 原则 防止微生物污染和有害因素影响 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘 划分不同功能区或用铝合金板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室 一般包括：准备室、培养室和缓冲室 准备室：用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。 培养室：用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。天花板不宜高过2.5M。 缓冲室：（更衣室） 实验室设备 一、最常用的大型必备装置和仪器 净化工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、离心机、 冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波 清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等 二、最常用的培养器具 l.过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器 2.手术器械 3.培养器皿：溶液瓶、培养瓶 、培养皿、多孔培 养板、移液管和吸管、离心管 净化工作台（必备！） 外流式 （基本不用） 侧流式 　直流式 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 注意检查是否堵塞！（看酒精灯） 超净工作台结构和模式图 CO2培养箱： 用于维持适当温度、湿度与pH 质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过0.5度;培养箱的温度设在35～37℃，这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。 培养容器需与外界保持通气状态 箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精） 水槽:保持一定湿度 二氧化碳培养箱 电热干燥箱 烘干和干热消毒玻璃器皿 鼓风与升温同时进行，100度时可停止鼓风 禁止先升温后鼓风 100度以下时再打开箱门 金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒 电热恒温鼓风干燥箱 高压灭菌锅 学生正在进行细胞观察 倒置显微镜 倒置显微镜 水纯化装置 很少使用离子交换装置处理的水 蒸馏水装置分金属和玻璃两种 洗刷装置 人工洗刷 超声洗涤装置 玻璃吸管洗涤 自动双重纯水蒸馏器 超纯水仪 正压过滤器 细胞冷冻贮存器 离心机 小型台式离心机符合分离细胞要求 加样器 离心机 液氮罐 Operation of Micropipette 1、select suitable pipette and tips according to the desired volume 2、set the volume 3、extracting the solution through pushing but