DNA多聚酶链式反应增DNA片断.pptxVIP

会计学;一、课题背景;第2页/共57页;(一)、细胞内参与DNA分子复制的组分及作用;(二)PCR技术;PCR;2、DNA合成的方向;第7页/共57页;;5′;5′;第11页/共57页;DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。 ;3、 DNA 分子的热变性原理：;DNA双链;4、体外复制DNA (PCR) 的条件;（三）、PCR的反应过程;（2）复性：;;PCR反应的温度循环周期 PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性（94℃） 、复性（55 ℃）和延伸（72 ℃）三个步骤完成的。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（2）PCR循环—复性（退火）;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;4、前三次循环图解??;;难点解析：;5、循环特点：;三、实验操作;PCR仪;微量离心管;准备好PCR反应体系的配方 ;实验操作循环程序;PCR反应（无PCR仪时）;四、操作提示;3．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。;五、结果分析与评价;（二）实验中DNA含量的测定;第42页/共57页;2、具体操作：; 根据下面的公式计算DNA含量： DNA含量(μg/ml)＝50 ×(260nm的读数)×稀释倍数;紫外分光光度计;1、PCR优点：;2、PCR技术的意义;1.?遗传病诊断：α型、β型地中海贫血症，血友病以及苯丙酮尿症的产前胎儿诊断等。 2.?病毒感染疾病诊断：肝炎病毒系列(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等)，艾滋病毒(HIV-I)、人乳头瘤病毒(HPV)、人巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)等。 3.?传染性病原体检测：沙眼衣原体、肺炎支原体、立克次氏体、真菌、梅毒螺旋体、疟原虫、弓形体、结核杆菌、分枝杆菌等。 4.?肿瘤基因检测：癌基因、抑癌基因、肿瘤药敏基因等。; PCR仪加热使（ ）变性, 复性使引物与模板DNA（ ）,延伸需将反应温度升至中温( ),在（ ）的作用下,以 （ ）为原料,以（ ）为复制的起点,合成新链。 如此重复改变反应温度,经（ ）三个阶段为一个循环; 每一次循环使特异区段的基因??贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射下肉眼能见到扩增特异区段的DNA带。;练习巩固;6、关于PCR技术的应用，错误的一项是 A 古生物学、刑侦破案、DNA序列测定 B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学 C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案 D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定;7、PCR技术最突出的优点是 A 原理简单 B 原料易找 C TaqDNA聚合酶有耐热性 D 快速、高效、灵活、易于操作;5、用图表示PCR过程的前三次循环 （1）请将PCR缓冲液中提供的4种组分填写在下列方框内： （2）第一轮循环中的变性是指____；复性是指 ；延伸是指_ _。;DNA模板;