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实时荧光定量PCR技术 PCR技术从定性到定量的飞跃 1985 年Kary Mullis 发明了聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），并因此于1993 年 获得了诺贝尔化学奖。从1985 年至今的20 多年里，PCR 技术得到了飞速的发展。 传统的PCR 技术主要是对扩增产物进行定性判断，产物检测在反应结束后进行。一般通过电泳、溴化 乙锭染色和紫外灯下检测等步骤判断产物是否存在，并通过与已知片断大小和含量的标准的对照，大致 测产物的大小及生成量。 从20 世纪90 年代初开始，许多实验室开始致力于相对准确的定量 PCR 技术的研究。在这一过程中， 应用较多的是半定量PCR （semi-quantitative PCR ）技术。半定量PCR 技术是在扩增靶序列的同时，选 定一对照序列（通常是管家基因）进行扩增，在PCR 过程的指数增长期终止反应，再通过电泳比较目的基 因和管家基因的产物相对量，从而得到起始模板在量的差异。半定量PCR 技术的准确性主要受2 个环节 的影响，一是必须确保PCR 是在扩增的指数增长即线性阶段结束，因为只有在此阶段PCR 的产物量才与 起始模板量有对应关系；二是检测要通过常规的电泳方法进行，人为误差的因素将会影响这种定量的准确 度。 为了提高定量的准确性，人们开