微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测.pdf

微生物实验报告水中细菌总数与大肠菌群的检测 实验六 水中细菌总数与大肠菌群的检测 摘 要:本实验以测定公园河流水的细菌总数与大肠菌群的数量,来测定特定地点的水质情 况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标,判定水体的质量。对该实验点的水 源作出了定性的评价,以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。 关键字:河流水;细菌总数测定;大肠菌群;EMB培养 前言 各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正 相关,因而就是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数就是指1mL 水样中所含细菌菌 落的总数[cfu/g(mL)],可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源就是否 被粪便污染,并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。 特征:G-无芽孢杆菌,兼性厌氧、在37℃24h 内能发酵乳糖产酸、产气。 多管发酵法 初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养,产酸产气; 分离培养:伊红美蓝(EMB)平板上划线分离,出现紫色、粉红色特征性菌落; 复发酵验证:挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。 材料与方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于水中细菌总数测定 牛肉膏5g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g, 蒸馏水1000ml; pH 7、0 乳糖胆盐蛋白胨培养基:用于初发酵 1×:蛋白胨 20g、牛胆盐5g、乳糖 10g、0、04%溴甲酚紫水溶液 25mL(调pH 值后加)、水 1000mL、pH 7 、2 －7 、4 三倍浓缩液(3 ×):除水以外,其余成分取三倍用量 分装:1 ×的培养基分装9ml/管, 3 ×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶,均装上德汉氏小管。 灭菌条件 ℃ 。 :115 ,15min EMB 培养基:用于大肠菌群菌落鉴定 脱水培养基,按说明书操作,水用量为90% 。 水源:紫竹院河水 仪器: 高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环 、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒 精灯、显微镜等。 试剂 : 牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉,伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0 、04%溴甲酚紫水溶 液、胆盐、革蓝氏染色试剂 具体实验步骤: 1),相关器械的灭菌操作, 以及前往紫竹院取少量的样品水。 2),按照上述的配料,无菌操作配置培养基。 3),细菌总数的测定:取上述样品水,一次稀释10-1,10-2,10-3,3 个浓度。对于每个浓度,取1ml 稀 释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中,立即混匀,每个浓度重复一次。将平皿倒置培养在 37℃的温箱24h,计算平皿的细菌总数。 微生物实验报告水中细菌总数与大肠菌群的检测 0 -1 -2 4),大肠菌群的测定:将样品水稀释成10,10 ,10 ,3个梯度。 实验结果与数据分析 1,细菌菌落总数 稀释浓度及菌落数 平板菌落 报告方式 菌落总数 组别 (cfug , 10-1 10-2 10-3 状况 选取 cfu/ml 1 12 0 0 最低稀释 度下菌落 2 4 0 0 数 8、0×10 均小于30 × 平均 8 0 0 稀释倍数