(完整版)荧光和化学发光免疫分析方法.pdfVIP

(完整版)荧光和化学发光免疫分析方法 荧光和化学发光免疫分析方法 免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应, 应用制 备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原.由于免疫的特异性结合，免疫 分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。本文将对 这两种免疫分析方法进行详细的介绍。 一、免疫 免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质,并通过免疫应答排除抗原性异物,以维持机体 生理平衡的功能。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成 分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维 持人体的健康. 特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制,针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细 胞）分泌的抗体,只能对同一种抗原发挥免疫功能.而对变异或其他抗原毫无作用。 1、抗原 1。1抗原的定义 抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（免疫原性) ，并能与相应抗 体在体内或体外发生特异性结合的物质(免疫反应性)。 抗原一般为大分子物质，其分子量在 10kD 以上. 1。2抗原的分类 完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。 半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。如 大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结 合后形成复合物，便获得了免疫原性， 1。3抗原的性质 决定簇是指抗原分子表面的基团,它直接决定免疫学反映的特异性. (完整版)荧光和化学发光免疫分析方法 抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应 答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。 因此,抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。 2、抗体 2.1抗体的定义 抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋 白。 2.2抗体的结构 抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性 结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。 人免疫球蛋白有五类，分别为 IgG、IgA、IgM、IgD和 IgE. 3、抗原抗体的结合 体外抗原抗体反应又称血清学反应 第一阶段为抗原和抗体的特异性结合,需时短，几秒至几分钟，无可见现象出现。 第二阶段,可见反应阶段，表现为凝集、沉淀、细胞溶解等,时间较长，历时数分钟、数小 时以致数天 4、抗原抗体结合的特点 （1）抗原抗体结合具有高度特异性，即一种抗原分子只能与由它刺激所产生的抗体结合 而发生反应。抗原与抗体两者为非共价键结合，为可逆反应 （2）抗原与抗体的结合，在一定浓度范围内，只有当两者分子比例合适时，才出现可见 反应；以沉淀反应为例,分子比例合适，沉淀物产生既快又多，体积大。分子比例不合适，沉 淀物产生少，体积小，或不产生沉淀物。 (完整版)荧光和化学发光免疫分析方法 （3)特异性抗原和抗体有相对应的极性基，抗原和抗体的特异性结合，也就是这些极性基 的相互吸附。抗原和抗体结合后就由亲水性变为疏水性,此时易受电解质影响。如有适当浓度 的电解质存在，就会使它们失去一部分负电荷而相互凝聚，于是出现明显的凝聚或沉淀现象 若无电解质存在，则不发生可见反应 （4）合适的 pH 是抗原抗体反应必要的条件之一 pH 过高或过低可直接影响抗原和抗体的 理化性质 二、免疫分析 1、定义 免疫分析法利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物 等）的分析方法 2、分类 非标记免疫分析技术：免疫扩散、免疫电泳 标记的免疫分析技术：酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法 (荧光免疫技术、