任务二 动物性食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精） 残留量的测定.pptxVIP

农产品检测技术项目六 肉品检验项目六 肉品检验一、测定意义二、测定原理三、仪器用具四、试剂五、操作步骤六、结果计算任务2 动物性食品中克伦特罗 残留量的测定一、测定意义克伦特罗的测定 盐酸克伦特罗又名瘦肉精，它不是兽药，早期仅在医学上用于急救、平喘，是肾上腺素类神经兴奋剂，属于非蛋白质激素，主要中毒症状是肌肉震颤、心慌、头疼、恶心、呕吐等， 特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等患者危害更大，严重的可致死。 我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局在2002年9月10日发布的《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中，将盐酸克伦特罗等列为禁用药品。然而仍有极个别养殖户因重视程度不够或受经济利益驱使，在饲料里私自添加“瘦肉精”因此而引发的中毒事件频繁发生。二、测定原理克伦特罗的测定1、测定方法GB/T5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定 第二法 高效液相色谱法（HPLC）2、测定原理 固体体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆，液体试样加入高氯酸溶液，进行超声加热提取后，用异丙醇+乙酸乙酯(40+60)萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇＋氨(98＋2)溶液洗脱，洗脱液经浓缩，流动相定容后，在高效液相色谱仪上进行测定，外标法定量。三、仪器用具克伦特罗的测定1、高效液相色谱仪2、水浴超声清洗器3、具塞磨口玻璃离心管： 11.5cm(长)×3.5cm(内径)4、5mL玻璃离心管5、酸度计6、离心机7、振荡器8、旋转蒸发器 9、旋涡式混合器10、针筒式微孔过滤膜 （0.45μm，水相）11、N2-蒸发器12、匀浆器13、弱阳离子交换柱 （LC-WCX）3mL 14、天平15、平头微量注射器四、试剂克伦特罗的测定1、超纯水2、磷酸二氢钠：分析纯3、氢氧化钠：分析纯4、氯化钠：分析纯5、高氯酸：纯度70%6、浓氨水：分析纯7、异丙醇：HPLC级8、乙酸乙酯：HPLC级9、甲醇：HPLC级10、乙醇：HPLC级11、克伦特罗：纯度≥99.5%四、试剂克伦特罗的测定12、甲醇+水（45+55）：取甲醇450mL、超纯水550mL，混合均匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤后，装入流动相贮液器内，超声振荡器脱气15-20min。13、异丙醇+乙酸乙酯（40+60）：取异丙醇40mL、乙酸乙酯60mL，混合均匀。14、乙醇+浓氨水（98+2）：取乙醇98mL、浓氨水2mL，混合均匀。15、高氯酸溶液（0.1mol/L）：准确称取14.35g高氯酸，用超纯水稀释并定容至1L，摇匀。?四、试剂克伦特罗的测定16、氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称取40g氢氧化钠，用超纯水溶解并定容至1L摇匀。17、磷酸二氢钠缓冲液（0.lmol/L，pH=6.0）：准确称取15.6g磷酸二氢钠，用超纯水溶解并定容至1L，摇匀。18、克伦特罗标准溶液：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配制成浓度为250mg/L的标准储备溶液，贮存于冰箱内（0~4℃）；使用时用甲醇稀释成0.5mg/L的克伦特罗标准使用液，进一步用甲醇+水（45+55）适当稀释。五、操作步骤克伦特罗的测定1、提取 称样----匀浆----超声----水浴加热----冷却----离心取清液----调pH----加氯化钠，混匀----振荡提取---萃取----蒸发浓缩----溶解洗涤，滤膜过滤----定容五、操作步骤克伦特罗的测定2、净化 依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=6.0）、3mL水冲洗弱阳离子交换柱，取适量的提取液至弱阳离子交换柱上，弃去流出液，分别用4mL水和4mL乙醇冲洗柱子，弃去流出液，用6mL乙醇+浓氨水（98+2）冲洗柱子，收集流出液，将流出液在N2-蒸发器上浓缩至干。五、操作步骤克伦特罗的测定3、试样测定前的准备 于净化、吹干的试样残渣中加入100~500μL流动相，在旋涡式混合器上充分振摇，使残渣溶解，液体浑浊时用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，上清液待进行液相色谱测定。五、操作步骤克伦特罗的测定4、测定（1）色谱柱：BDS或ODS柱，250mm×4.6mm，5μm（2）流动相：甲醇+水（45+55）（3）检测波长：244nm（4）流速：1mL/min（5）柱箱温度：25℃（6）进样量：20~50μL（7）定量方法：外标法六、结果计算克伦特罗的测定式中：X ——试样中克伦特罗的含量，单位μg/kg m1 ——进样的样液中克伦特罗的质量，单位为ngf ——试样稀释倍数m0 ——试样的取样量，单位g计算结果表示到小数点后两位；在重复条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。