高效液相色谱法测定饮料中乙酰磺胺酸钾含量的不确定度评定.docxVIP

高效液相色谱法测定饮料中乙酰磺胺酸钾含量的不确定度评定 测量不确定度指根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数。测量不确定度是一个与测量结果相关联的参数，一个完整的检测结果，不仅要给出被测量的最佳预测值，还需给出测量结果的不确定度，因此测量不确定度在检验检测领域中应用越来越广泛。近年来，各种具有抗疲劳、抗氧化、镇静安眠等保健功能的保健食品不断涌现，其中基于天然产物的食品和饮料尤其引人关注。我国东北地区具有丰富的天然植物资源，基于天然产物的饮料如基于五味子、玫瑰茄、野生蓝莓和树莓、刺五加等的饮料[7-8]，原料来源丰富，具有各种独特的保健功效，除其中的活性成分外，饮料中添加剂成分的含量测定也是饮料质量监控的重要环节。乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）为人工合成甜味剂，广泛用于饮料、糖果、糕点、果酱等食品中[9]，我国强制性国家标准[10]中明确规定饮料中乙酰磺胺酸钾最大使用量0.3g/kg。目前，乙酰磺胺酸钾测定方法包括高效液相色谱法[11]、液相色谱—串联质谱法[12]、离子色谱法[13]、毛细管电泳法[14]等。本研究根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[1]、GB/T 27418-2017《测量不确定度评定和表示》[15]和CNASGL006:2019《化学分析中不确定度的评估指南》[16]的要求，对高效液相色谱法测定饮料中乙酰磺胺酸钾含量[17]的不确定度进行分析和评定，旨在找出检测方法中不确定度的主要来源，确定测定结果的主要影响因素及可信程度，为正确评价检测结果提供科学依据。 1.材料与方法 1.1 标准品 乙酰磺胺酸钾标准品（国家标准物质中心）：0.25g（纯度≥99%）。 1.2 仪器设备 LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；AS3120超声波提取仪（脱气用）。 1.3 色谱条件 色谱柱：Agilent C18柱（4.6mm×150mm×5μm）；流动相：0.02mol/L硫酸铵（800）+甲醇（150）+乙腈（50）+10%H2SO4(1ml)；流速：1ml/min；进样量：10μL。 1.4 样品前处理 吸取2.5ml果汁饮料，加水约20ml，混匀后，4000r/min离心15min，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液滤至柱表面时，用流动相洗脱，收集洗脱液25ml，混匀，超声脱气，待HPLC分析用。 1.5 标准曲线 准确称取0.1000g乙酰磺胺酸钾标准品，用流动相逐级稀释，配成0.04mg/ml标准溶液，混匀，再分别吸取此溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml于10ml容量瓶中，加流动相至刻度，混匀，配制成浓度分别为0.004mg/ml、0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml、0.020mg/ml的标准系列。 1.6 测定方法 取上述待测液和标准溶液，过0.45μm滤膜后，分别吸取10μL进行HPLC分析，测定其峰面积，以保留时间定性，峰面积定量，从标准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾的含量。 1.7 计算方法（数学模型） 式中：X为试样中乙酰磺胺酸钾的含量（mg/L）；C为标准曲线上样液中乙酰磺胺酸钾的含量（μg/ml）；V为试样稀释总体积（ml）； m为试样取样量（g）。 2.结果与分析 2.1 测量模型和不确定度计算公式 （1）测量模型。根据上述计算公式，并考虑其他因素，得到用于测量不确定度评定的数学模型。 目前，化学测量中，测量结果以方法中计算公式得到的单个测得值或平均值报告，忽视了测量不确定度的存在，报告的是不完整的测量结果。测量不确定度评定就是为了更科学、更准确地表达测量结果的。结果应表达为： y=X±U(y) 式中，y为试样中乙酰磺胺酸钾的测量结果（mg/ml）；X为一次试样中乙酰磺胺酸钾的测得值（mg/ml）；U(y)为测得值的扩展不确定度（mg/ml）。 测量模型函数关系表达式为： Y=f(X1、X2、X3…… Xn) 式中，Y为饮料中乙酰磺胺酸钾含量，这里X1、X2……、Xn表示鱼骨刺图中一级因素（与分量汇总表中的分量一致），并标识下面计算时用到的缩写字母。如下式表示： Y=f (c, v, v1) 式中，Y为试样中乙酰磺胺酸钾的含量（mg/ml）；f为测量函数；C为由标准曲线方程计算得到的进样液中乙酰磺胺酸钾的含量（mg/ml）；V1为试样稀释总体积（ml）；V为试样体积(ml)。 （2）不确定度计算公式。相对合成标准不确定度计算公式： 式中，urel(y)为测得值的相对合成标准不确定度；urel(xn)为xn的相对标准不确定度。xn的不确定度具体计算公式见具体分量评定。 合成标准不确定度计算公式为： uc(y)=Xurel(y) 扩展不确定度计算公式为： U=kuc(y) 2.2 不确定度来源分析 影响饮料中乙酰磺胺酸钾含量的测量