DDRGK1基因与奶牛乳腺炎感染相关性初步研究.pdf

DDRGK1 基因与奶牛乳腺炎感染相关性初步研究 摘 要 DDRGK 结构域蛋白1 （DDRGK1 ）是一种重要的内质网应激相关蛋白，在分泌 细胞中有较高水平的表达，参与腺上皮细胞的免疫和炎症反应，提示它在乳腺炎应 激中可能起重要作用。本研究以中国荷斯坦奶牛乳牛（正常奶牛和临床乳腺炎奶牛） 为研究对象，探究DDRGK1 基因表达及遗传多态性与奶牛乳腺炎应激的相关性，显 示奶牛乳腺炎组织中DDRGK1 基因mRNA 表达量显著下调（p 0.01 ），其相关基因 UFM1 基因mRNA 表达量显著增加（p 0.01 ），炎症相关基因TNF-α（p 0.01 ）、IL-1β （p 0.001 ）、IL-8 （p 0.01 ）和IL-10 （p 0.01 ）mRNA 表达水平均显著升高，暗 示该基因可能参与奶牛乳腺组织的免疫应答和炎症反应；在体外 bMECs 应对 LPS （E.coli ）刺激中，DDRGK1 mRNA 表达水平具有时间依赖性，并且在60min 时表达 水平最低（p 0.05 ）。此外，在DDRGK1 基因siRNA 干扰bMECs 中，UFM1（p 0.05 ）、 TNF-α （p 0.001 ）、IL-8 （p 0.01 ）和NF-κB （p 0.01 ）等基因mRNA 表达水平 均显著上调；在LPS 刺激下，与未转染的bMECs 相比bMECsDDRGK1- 中UFM1 （p 0.01 ）、TNF-α （p 0.001 ）、IL-8 （p 0.001 ）和NF-κB （p 0.01 ）的mRNA 表达水 平均显著上调，提示DDRGK1 在bMECs 应对LPS 刺激的应激反应中起到重要作用。 利用基因组DNA 直接测序及MegAlign 序列比对方法，检测了DDRGK1 基因 5’-UTR 、CDS、3’-UTR 区的单核苷酸多态性（SNP），并成功筛选到4 个SNP 位点， 其中CDS 区有3 个SNPs （1415th G/C、6462th A/T 和10461th G/A），3’-UTR 区有1 个SNPs （10606th C/T）。利用交叉表分析上述4 个SNPs 与乳腺炎应激的相关性， 发现SNPs 6462th A/T （p （Pearson chi-square value ）0.05 ）、10461th G/A （p 0.001 ） 和10606th C/T（p 0.001 ）与奶牛乳腺炎应激存在显著相关性、1415th G/C（p 0.05 ） 与奶牛乳腺炎应激不相关。DDRGK1 基因编码产物序列分析发现 SNPs 6462th A/T 和10461th G/A 分别引起氨基酸残基 （198th Val/Glu 和305th Arg/Gln ）的改变，并影 响蛋白质的亲水性、疏水性、以及二级结构（α-螺旋、β-折叠和 β-转角）的变化等， 可能影响DDRGK1 蛋白的三级空间结构及功能。 综上所述，本研究首先证实DDRGK1 基因参与乳腺炎奶牛乳腺组织的应激反应 及LPS 刺激的bMECs 的应激反应。其次标记3 个SNPs （6462th A/T、10461th G/A 和10606th C/T）与中国荷斯坦奶牛乳腺炎应激显著相关，其中6462th A/T 和10461th G/A 影响氨基酸残基的转变，暗示上述两个 SNPs 可作为中国荷斯坦奶牛乳腺炎应 激的潜在分子标记，为中国荷斯坦奶牛乳腺炎抗性育种提供分子遗传学依据。 关键词：DDRGK1 ；乳腺炎；SNPs；应激；中国荷斯坦奶牛 I 第一章 文献综述 1.1 奶牛乳腺炎 1.1.1 奶牛乳腺炎概述 奶牛乳腺炎是奶牛最常见的生产性疾病，对奶牛健康具有公认的有害影响，同 时给奶业生产造成重大经济损失，生产者及研究者们一直在寻找有效的措施来预防 或控制奶牛乳腺炎的发生和发展[1, 2] 。根据临床病症，乳腺炎可被分为临床型乳腺 炎和亚临床型乳腺炎（隐性乳腺炎）。虽然目前奶牛的养殖条件及生产管理等均