章基因重组与基因工程.pptxVIP

会计学第1页/共76页第一节 自然界中的DNA重组和基因转移第2页/共76页DNA重组 同源重组：最基本的重组方式，发生在同源序列间 的重组。 特异位点重组：广泛存在，由整合酶催化在两个 DNA序列的特异位点间发生的整合。 转座重组：基因从一个位置转移到另一个位置，由可 移动的DNA介导。第3页/共76页基因转移 接合作用：细菌通过菌毛相互接触时，质粒可从一个 细胞转移至另一个细胞 转化作用：通过自动或人为的供给外源DNA，使细胞 或培养的受体细胞获得新的遗传表型 转导作用：当病毒从被感染的细胞（供体）释放出 来，再次感染另一细胞（受体）时，发生 在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及 基因重组 第4页/共76页 接合作用第5页/共76页 转化作用第6页/共76页第7页/共76页第二节 重组DNA技术 --DNA克隆，分子克隆第8页/共76页1972年，伯格首次证明可以用两种不同物种的基因来人工合成DNA分子. 因在核酸的生化领域完成的重大研究获得了1980年的诺贝尔化学奖。 加州大学旧金山分校的赫伯特·博耶和斯坦福大学的斯坦利·科恩公布了他们的重组试验。他们使用的是大肠杆菌中具有抗四环素功能的pSC101质粒，通过在这个质粒中嵌入能够抗卡那霉素的基因，含有该质粒的大肠杆菌就可以在同时加入了四环素和卡那霉素的培养基中生存繁殖。第9页/共76页一、重组DNA技术相关概念（一）DNA克隆（也称基因克隆或重组DNA） 克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化：获取同一拷贝的过程，也称无性繁殖。 DNA克隆：应用酶学的方法, 在体外将各种来源的遗传物质DNA与载体DNA接合成具有自我复制能力的DNA分子—复制子，再通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA分子的过程，也称基因克隆、重组DNA。名词解释第10页/共76页重组DNA分子的获得重组DNA分子的扩增（克隆）第11页/共76页 目的 :1、获得大量某一感兴趣的基因或DNA序列 2、获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质)基因工程---- 实现基因克隆所采用的方法 及相关的工作称基因工程, 又称重组DNA工艺学。 生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、 酶工程、细胞工程等第12页/共76页（二） 工具酶限制性核酸内切酶T4DNA 连接酶 DNA聚合酶I （Klenow片段） 逆转录酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶BamH I第13页/共76页 限制性核酸内切酶（ Restriction Endonuclease，RE ）：识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。第14页/共76页来源: 超过3000种，绝大多数限制性内切酶来自于细菌作用： 与甲基化酶共同组成细菌的限制修饰系统，限制 外源DNA，保护自身DNA。分类： 根据酶的组成，所需因子，裂解DNA方式不同分为I、II、III 型，基因重组过程中常用II型　Ⅰ类　　　识别位点复杂，特异性差，切割位点距识别点远。　　 Ⅱ类　　 识别切割特异性强，切割发生在识别位点。　　 Ⅲ类　　 切割位点在识别位点周围，酶活性不单一。斜体第15页/共76页EcoR VBamH IGATATCCTATAGGAT ATCCTA TAG+第16页/共76页二元旋转对称平末端切口同功异源酶BamH IBst I第17页/共76页同尾酶BamH IBgl II第18页/共76页第19页/共76页T4DNA连接酶噬菌体T4DNA连接酶 酶的催化过程需要ATP辅助，16℃ T4DNA连接酶可连接DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。 不能催化两条游离的DNA链相连接 第20页/共76页（三）目的基因（又称外源DNA）基因组DNA： 在真核生物体，基因组是指一套完整单倍体DNA（染色体DNA）和线粒体DNA的全部序列。 cDNA： 经反转录合成的、与RNA（mRNA或病毒RNA）互补的单链DNA。。第21页/共76页（四）基因载体 为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 载体的选择标准第22页/共76页 常用载体：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA 粘粒(柯斯质粒）、细菌/酵母人工染色体 克隆载体(cloning vector)： 为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体。 表达载体(expression vector)： 为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的 载体。 在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等）。第23页/共76页1、质粒定义：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。特点：能在