铜绿假单胞菌与鲍曼不动杆菌STH的酶学鉴定及功能研究.pdfVIP

安徽师范大学硕士学位论文 铜绿假单胞菌与鲍曼不动杆菌STH 的酶学鉴定及功能研究 铜绿假单胞菌与鲍曼不动杆菌STH 的 酶学鉴定及功能研究 摘 要 可溶性吡啶核苷酸转氢酶(soluble pyridine nucleotide transhydrogenase, STH or UdhA)是一种非能量依赖性的吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶(pyridine nucleotide- disulfidereductases,PNDR)，可以特异性地将C 氢负离子从NADH 和NADPH 的烟酰 4B + + 胺环转移到NADP 和NAD 上，参与调节细胞内的氧化还原平衡。目前STH 在代谢工 程中应用广泛，但它在自然界的分布范围较为狭窄，至今仅有少数来自γ-变形菌纲STH 的报道，其晶体结构和生理功能均不明确。 1. STH 的酶学鉴定 STH (Pseudomonas aeruginosa STH PaSTH) 本实验对铜绿假单胞菌 ， 和鲍曼不动杆 STH (Acinetobacter baumannii STH AbSTH) 菌 ， 进行异源表达、纯化和体外酶学研究。 o o PaSTH AbSTH 32 C 30 C pH 和 的生化性质较为相似：最适反应温度分别为 和 ；最适 o pH 7.0 pH 7.3 PaSTH 60 C AbSTH 都为中性，分别为 和 。热稳定性方面， 在 时失活， o 在70 C 时失活。生物体内常见的金属离子对PaSTH 没有激活作用，反而有不同程度 的抑制作用，其中Zn2+的抑制效果最强烈；对AbSTH 来说，一价金属离子对其有激 Mg2+ Zn2+ 活作用，二价金属离子中除 其余表现为抑制作用， 的抑制最强烈。三种腺嘌 (2-AMP ADP ATP) PaSTH AbSTH 呤核苷酸 、 、 对 有不同程度的抑制作用；对 则有不 2-AMP ADP AbSTH ATP 同的影响，其中， 和 对 有明显的激活作用，而 有抑制作用。 STH 的底物动力学参数可以通过产物thio-NADH 的光吸收值变化来进行测定。结 AbSTH PaSTH NADPH (K ) NADPH 果显示 和 对底物 的米氏常数 非常接近，两者对 m AbSTH NADPH K 47 μM