玻利维亚进口盐中可培养嗜盐古菌组成分析及一株盐矿来源嗜盐古菌病毒的生物学特性研究.pdfVIP

玻利维亚进口盐中可培养嗜盐古菌组成分析及一株 盐矿来源嗜盐古菌病毒的生物学特性研究 摘 要 嗜盐古菌是一类好氧或兼性厌氧的古菌类群，通常生活于高盐环境中。独特 的细胞结构和生理代谢系统赋予其重要的研究价值。本研究采用不同pH 值的嗜 盐古菌培养基，利用纯培养分离的方法，基于16S rRNA 基因的测序和序列相似 性分析，对玻利维亚进口商品盐中嗜盐古菌的物种多样性进行较为系统的研究。 从该样品盐中共分离到505 株嗜盐古菌，分别来自于Natronococcus 、Natrinema 、 Natrialba 、Halovivax 、Haloterrigena 、Halorubrum 、Halopenitus 、Halobellus 、 Halococcus 、Halobacterium 、Halalkalicoccus 、Haloarcula 和 Halosimplex 等 13 个属，其中有 180 株属于Halobacterium 属，占比约35.6%，是利用纯培养方法 所揭示的优势类群。物种多样性分析结果显示该样品中可培养嗜盐古菌数量较高、 物种数目多，但优势种群明显且均匀度不高，总体而言多样性不高。不同pH 培 养基纯培养分离结果显示，pH 8.0 和pH 9.0 的培养条件下分离得到的菌株物种 多样性较高：前者Shannon 指数为2.8 ，simpson 指数为0.9 ；后者Shannon 指数 为2.4 ，simpson 指数为0.9 。此外，采用胞外酶活的检测方法，对各个属的代表 菌株进行胞外酶酶活和产嗜盐菌素能力筛查。研究发现有6 株产胞外淀粉酶，5 株产胞外明胶酶，2 株产胞外蛋白酶菌株，胞外氧化酶和触酶活性在嗜盐古菌中 普遍存在；并发现菌株Halobacterium sp. J-68 对嗜盐古菌 Haloferax sp. Q22、 Halorubrum sp. LN72 、Haloarcula hispanica ATCC 33960 和Halorubrum sp. F4 均 具有显著的拮抗活性。本研究通过纯培养方法获得了丰富的嗜盐古菌菌株资源， 并初步揭示了玻利维亚进口商品盐样品中可培养嗜盐古菌的群落组成和多样性 分布情况。 在高盐生态系统中，嗜盐古菌及嗜盐古菌病毒是极端高盐环境中活跃的主要 微生物。由嗜盐古菌及其病毒组成的二极生态系统在高盐环境的物质循环和能量 流动中发挥着至关重要的作用。本研究以Halorubrum sp. LN27 为宿主菌，对分 离自安徽定远东兴盐矿的嗜盐古菌病毒VOLN27B 的生物学特征进行系统研究。 I 结果显示，该病毒是典型的头尾可伸缩形病毒，具有一个二十面体的头部以及一 个可伸缩的尾部；基因组为一线性双链DNA，大小为76576 bp, DNA 的G+C 含 量为56.14 mol%；含有113 个预测的开放阅读框(ORFs)；与嗜盐古菌头尾型病毒 HRTV-5 存在最高的基因组序列相似性（76% ）；随着培养时间的延长，噬菌斑 呈现明显的变大的现象；具有较强的吸附能力，在 1 min 内基本完成吸附；38 °C 为病毒侵染宿主菌形成清晰噬菌斑的最佳温度；对酸性较为敏感，在pH5 时即 丧失感染活性；在4 °C 时保存数月，病毒依然保持得较好的感染活性；病毒从 侵染宿主菌到在细胞内形成具有感染活性病毒粒子的时间约为 8h；病毒的潜伏 期约为8- 12 h，并在21 h 的时候达到最大的病毒释放量；该病毒的裂解量约为 30 PFU/细胞；具有较窄的宿主范围，尚未发现其能感染其他的嗜盐古菌。 利用纯培养方法，对玻利维亚进口商品盐中嗜盐古菌物种多样性分析，从而 获得了505 株嗜盐古菌资源，其中包括一些产胞外淀粉酶，明胶酶，蛋白酶菌株 和具有拮抗作用的菌株，进一步丰富了我们对高盐环境中嗜盐古菌的认识，也积 累了宝贵的嗜盐微生物菌种资源，为极端环境微生物资源的深入开发和利用奠定 基础。本研究对病毒分离纯化、全基因组分析、形态和生理特征等方面提供了新 的认识，有助于我们对病毒遗传进化和基因组变异的理解，也为深入探索嗜盐古 菌病毒与其宿主菌之间的相互作用提供宝贵的研究材料。 关键词：极端环境微生物，高盐环境，嗜盐古菌，16S rRNA 基因，物种多样性， 嗜盐古菌病毒