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(3)整个制备过程为何要经过两次筛选? (第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种),第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养,然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义,只不过克隆的不是B淋巴细胞,而是杂交瘤细胞。) 第三十一页,共四十三页,2022年,8月28日 关于高中生物选修人教版动物细胞工程 (2) 第一页,共四十三页,2022年,8月28日 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 胚胎移植技术 第二页,共四十三页,2022年,8月28日 (一)动物细胞培养 1.过程: 第三页,共四十三页,2022年,8月28日 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬液 细胞株 细胞系 (一)动物细胞培养 细胞增值 无限传代 去掉组织间 蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 细胞贴壁 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 第四页,共四十三页,2022年,8月28日 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养? (一)动物细胞培养 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 第五页,共四十三页,2022年,8月28日 2、有关概念 原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 第六页,共四十三页,2022年,8月28日 2、有关概念 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。 第七页,共四十三页,2022年,8月28日 3、动物细胞培养条件 1。无菌、无毒 2。营养:葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素和动物血清等。 3。温度:36.5+0.5 4。PH=7.2~7.4 5。气体环境:O2和CO2(95%空气+5%CO2) 第八页,共四十三页,2022年,8月28日 思考: 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料? 1、动物细胞培养液的主要成分是什么?较植物组培培养基有何独特之处? 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞? 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体? 主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有:1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强 成块组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体 第九页,共四十三页,2022年,8月28日 获得细胞 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 促生长因子 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 第十页,共四十三页,2022年,8月28日 4. 动物细胞培养技术的应用 (1)大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。 (2)解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。 (利用贴壁生长和接触抑制原理) (3)检测有关物质毒性。 (4)培养正常或病变细胞,用于科研。 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 第十一页,共四十三页,2022年,8月28日 (二)、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1.动物核移植 (1)概念:将供体体细胞的_________与受体去核卵细胞的细胞质进行___________,借助于_________的发育能力,经过培养发育成胚胎进而形成__________的技术。 (2)关键技术:_______________技术。 细胞核 人工组合 卵细胞 个体 细胞核移植 第十二页,共四十三页,2022年,8月28日 动物体细胞核移植技术和克隆动物 (3)哺乳动物核移植可以分为__________核移植(比较容易)和__________核移植(比较难)。 (4)选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞比
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