由于微生物细胞极其微小的研究其个体生长存在着技术上困.pptxVIP

第1页/共32页获得同步生长的方法：获得同步生长的方法主要有两类：环境条件诱导法：变换温度、光线、培养基等。造成与正常细胞周期不同的周期变化。选择法：选择性过滤、梯度离心。物理方法，随机选择，不影响细胞代谢。第一页，共33页。第2页/共32页Helmstetter-Cummings （硝酸纤维素薄膜）法步骤：将非同步的细菌液体培养物通过微孔滤膜，让细胞吸附于其上；然后将滤膜反置，再以新鲜培养液滤过。这时，一些未粘牢的细胞先被冲洗掉，接着脱落到培养液中的都是那些新分裂形成的细胞，于是就获得了同步生长 第二页，共33页。二、微生物的群体生长第3页/共32页1.无分支单细胞微生物的群体生长特征☆无分支单细胞微生物主要包括细菌和酵母菌，其群体生长是以群体中细胞数量的增加来表示的， ☆ 由一个细胞分裂成为两个细胞的时间间隔称为世代，一个世代所需的时间就是代时（Ｇeneration time, G ），代时也就是群体细胞数目扩大一倍所需 时间，有时也称为倍增时间。☆右图表示的是一个细胞经过若干代分裂后的情况。右图可见，每经过一个代时，细胞数目就增加一倍，呈指数增加，因而被称为指数生长，这就是单细胞群体生长的特征。第三页，共33页。2.无分支单细胞微生物的群体生长曲线第4页/共32页☆以细菌为例介绍无分支单细胞微生物群体生长规律，其结论也基本适用于酵母菌。☆生长曲线代表了细菌在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。☆每种细菌都有各自的典型生长曲线，但它们的生长过程却有着共同的规律性。一般可以将生长曲线划分为四个时期。第四页，共33页。第5页/共32页生长曲线的制作将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。第五页，共33页。第6页/共32页典型的生长曲线 （Growth curve）延滞期对数期稳定期衰亡期第六页，共33页。①延滞期（lag phase）第7页/共32页其它名称：停滞期、调整期、适应期1.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。2.特点：生长速率常数= 0细胞形态变大或增长细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物）3.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物第七页，共33页。第8页/共32页认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义：◆在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期；◆在食品工业上，尽量在此期进行消毒或灭菌★影响延迟期长短的因素：◆菌种：繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短；◆接种物菌龄：用对数生长期的菌种延迟期较短；◆接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用1/10的接种量）；◆培养基成分：◇在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期比在合成培养基上生长时短；◇接种后培养基成分有较大变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。第八页，共33页。②对数期（logarithmic phase）第9页/共32页其他名称：指数期 现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 特点：生长速率常数最大，即代时最短细胞进行平衡生长，菌体大小、形态、生理特征等比较一 致代谢最旺盛细胞对理化因素较敏感第九页，共33页。第10页/共32页★指数生长可以用下式表示： b = B×2nB, b 和 t 可由试验获得， n 可通过上式计算得出，将等式两侧取对数重排后得： lgb = lgB + nlg2n= lgb - lgB = lgb - lgB lg2 0.301 式中：B 为起始细胞数目，b 为指数生长某个时刻 t 时的细胞数目，n 为世代数第十页，共33页。第11页/共32页例如：一培养液中微生物数目由开始的12,000（B），经4h(t)后增加到49,000,000（b），这样， n＝(lg4.9×107－0lg1.2×104）÷0.301＝12★借助于 n 和 t ，还可以计算出不同培养条件下的代时G， G ＝ t / n在本例中，G＝4×60/12＝20min∴该种微生物的代时为20分钟。在4小时内共繁殖了12代。第十一页，共33页。第12页/共32页★ 代时能够反应细菌的生长速率，代时短，生长速率快，代时长，生长速率慢。在很多微生物学研究中常常要了解微生物的代时。 ★ 代时在不同种微生物中的变化很大，多数微生物的代时为1~3h,然而有些快速生长的微生物的代时还不到10min,而另一些微生物的代时却可长达几小时或几天；另外，同一种微