重组人胰岛素的研究历史与生产工艺.pptVIP

关于重组人胰岛素的研究历史与生产工艺 第一页，共十八页，2022年，8月28日 胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来糖尿病治疗。作用机理属于受体酪氨酸激酶机制。 一、胰岛素简介 第二页，共十八页，2022年，8月28日 第三页，共十八页，2022年，8月28日 3D Structure of Insulin 胰岛素二聚体（dimer） 胰岛素六聚体（hexamer ） 第四页，共十八页，2022年，8月28日 二、胰岛素的研究历史 1921年----由加拿大人F.G.班廷和C.H.贝斯特从动物胰腺中提取出胰岛素，开创了人类胰岛素治疗的历史。 1926年----重结晶胰岛素 1930s----传统中、长效动物胰岛素 1970s----单峰胰岛素和 单组分胰岛素  70年代末----半合成胰岛素 1982年----采用基因重组技术生产的人胰岛素正式上市。 90年代至今----重组人胰岛素类似物成功研发上市，包括超短效和长效人胰岛素类似物。 第五页，共十八页，2022年，8月28日 胰岛素的发展史 1920 1930 1940 1950 1960 1970 1980 1990 2000 1923 动物胰岛素 1973 单组分胰岛素 1987 人胰岛素 1996 胰岛素类似物 1946 NPH 胰岛素 1953 长效胰岛素 到1987第一支人胰岛素问世，并于同年应用于人，因为与人的天然胰岛素氨基酸序列完全相同，所以抗原性大大降低。 从动物胰岛素到人胰岛素是胰岛素历史的极大进步，之后动物胰岛素时代终结。 第六页，共十八页，2022年，8月28日 美国的礼来公司已经获准大规模工业化生产胰岛素 诺和诺德制造的胰岛素开始在市场上大量销售 法国赛诺菲安万特全球第一个生产甘精胰岛素类似物的企业 通化东宝中国最大的重组人胰岛素生产厂家 此外，还有甘李药业、江苏万邦、联邦制药等 胰岛素的生产 第七页，共十八页，2022年，8月28日 三、胰岛素制备工艺 以动物胰脏为原料提取胰岛素 ----酸醇提取法 ※传统胰岛素---猪、牛胰脏提取，只经一步重结晶 ※单峰胰岛素----凝胶过滤纯化 ※单组分胰岛素---凝胶过滤、离子交换纯化 从猪和牛的胰腺中提取，两者药效相同，但与人胰岛素相比，猪胰岛素中有1个氨基酸不同，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，因而易产生抗体 半合成胰岛素 ----将猪胰岛素第30位丙氨酸，置换成与人胰岛素相同的苏氨酸，即为半合成人胰岛素 重组DNA技术生产人胰岛素 ※AB链合成：分别表达AB链，化学方法连接 ※逆转录法：表达胰岛素原，酶切得到重组人胰岛素（广泛） 第八页，共十八页，2022年，8月28日 通过基因工程酵母菌E．coli发酵生产hPI，经后加工形成hI。 四、重组人工胰岛素 第九页，共十八页，2022年，8月28日 提取目的基因 4.1菌种制备 提取质粒 基因重组 将质粒送回大肠杆菌 胰岛素的产生 第十页，共十八页，2022年，8月28日 重组人工胰岛素的工业生产制备和深加工技术在如今已经是炉火纯青。有近百年 的发酵工程为基础，结合现在的基因工程技术的产物，在菌种制备后的发酵培养过程 更是可靠和安全的。 发酵培养流程见下图表： 4.2胰岛素的产生和精制（即菌种的发酵培养） 第十一页，共十八页，2022年，8月28日 菌种扩培 种子罐培养 发酵罐培养 发酵液固液分离 P1纯化 P1沉淀、干燥 P2纯化 P2沉淀、干燥 脱帽 成品粗纯化 成品精纯化 过滤冻干 发酵培养流程 第十二页，共十八页，2022年，8月28日 菌种扩陪：菌种库中取出菌种进行活化及初步扩大培养 种子罐培养：在种子罐中进一步的扩大培养，至菌种到对数生长期时转入发酵罐培养 发酵罐培养：分两阶段进行控制，第一阶段主要通过控制溶氧和补加甘油使菌体达到富集的目的，第二阶段通过补加甲醇使菌体进行高密度表达目的产物，HPLC检测目的产物含量 具体步骤 第十三页，共十八页，2022年，8月28日 * NPH胰岛素，即中性鱼精蛋白胰岛素，属于中效胰岛素，这类胰岛素的起效时间、峰值和作用时间皆较短效胰岛素长。 发现胰岛素的价格一开始没有那么贵的，最早发现胰岛素的是贝斯特，由弗雷德，班亭和查尔斯在1921年，但是他们却慷慨的卖掉了这个专利，这段时间，胰岛素便宜的随处可见，都以动物胰岛素为主。 ??? 胰岛素价格第一次升高是在上世纪50年代，人们所研制出长效胰岛素，长期胰岛素虽然不能容易在体内挥发，但是每天需要注射好几次。 ??? 胰岛素价格第二次升高是在1978