免疫荧光实验步骤.docVIP

免疫荧光实验步骤 直接免疫荧光法测抗原（1）基来源理 将荧光素标志在相应的抗体上，直接与相应抗原反响。其长处是方法简易、特异性高，非特异性荧光染色少。弊端是敏感性偏低；并且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的迅速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 （2）试剂与仪器 ??磷酸盐缓冲盐水（PBS）：L， ??荧光标志的抗体溶液：以L，的PBS进行稀释 ????缓冲甘油：剖析纯无荧光的甘油9份+碳酸盐缓冲液1份配制 ??搪瓷桶三只（内有L，的PBS1500ml） ??有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸润的纱布垫） ??荧光显微镜 ??玻片架 ??滤纸 ??37℃温箱等。 3）实验步骤 ①滴加L，的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持必定湿度。 ②滴加适合稀释的荧光标志的抗体溶液，使其完整覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一准时间（参照：30min）。 ③拿出玻片，置玻片架上，先用L，的PBS冲刷后，再按次序过L，的PBS三缸浸泡，每缸3-5min，时时振荡。 ④拿出玻片，用滤纸吸去剩余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。 ⑤立刻用荧光显微镜察看。察看标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示： -）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光光亮；（+++--++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度