抗体纯化磁珠.docxVIP

北京索莱宝科技有限公司 北京索莱宝科技有限公司 第 第 PAGE 1 页 ， 共 4 页 抗体纯化磁珠（Beads Magrose Protein A/ G Antibody Purification） 规格：20T 保存：2-8℃，保质期 1 年产品内容： Beads Protein A/ G 抗体纯化磁珠系列产品是由 NHS 活化的超顺磁性微球与 Protein A/G 共价结合形成的复合微粒。该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于 90%的抗体。 本产品为微米级磁性微球，熟练操作可在 15 min 内完成抗体吸附过程，30 min 内完成抗体纯化流程。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别，Magrose Protein A，Magrose Protein G 磁珠与不同抗体的亲和性比较参见下表。 产品特性： 产品名称 Magrose Protein A Magrose Protein G 磁珠粒径 30~150 μm 30~150 μm 磁珠浓度 10%（v/v） 10%（v/v） 配基 Protein A Protein G 介质 Magrose Magrose 抗体结合能力 25~30 mg Human IgG/mL Gel 25~30 mg Human IgG/mL Gel 保存温度 2~8℃ 2~8℃ Binding/Washing buffer PBST（pH 7.2~7.4）: 137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20 Elution buffer 100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 Neutrilization buffer 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 Storage buffer PBST（含 0.05% NaN3） 适用范围： 适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。 操作步骤(以纯化人血清 IgG 为例)： 1、样品处理：取人血清 100 μL 至 1.5 mL EP 管中，接着加入 900 μL Binding/Washing buffer， 充分混匀。 2、磁珠预处理：将抗体纯化磁珠漩涡振荡 30 s，使磁珠充分重悬；取 200 μL 10%（v/v）磁珠悬液置于另一新的 1.5 mL EP 管中。对磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液，用 1 mL Binding/Washing buffer 洗涤 2 次，磁性分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。 注意：该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，当目标抗体的浓度大于结合 量），若目标抗体浓度过低，如低于 70 μg/ mL 时，客户为了提高抗体回收率，可增加磁珠用量， 如提高至 3 倍磁珠用量。 3、抗体吸附：在步骤 2 预处理的磁珠管中加入步骤 1 处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约 25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转 EP 管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，翻转约 15 min 后进行磁性分离，移弃上清液。 4、磁珠洗涤：向 EP 管中加入 1 mL Binding/Washing buffer，振荡重悬磁珠后进行磁性分离，移弃上清液； 该操作重复 3 次。 5、抗体洗脱：在上述完成磁珠洗涤的 EP 管中加入 0.5~1.0 mL Elution buffer，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约 25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转 EP 管，翻转 10 min 后进行磁性分离，收集上清液至新的 EP 管。 注意事项：该步骤 Elution buffer 用量，建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在 0.6~1.2 mg/mL，此时第 1 次洗脱条件中 95%以上的抗体将被洗脱下来；若 Elution buffer 用量过少，会导致部分抗体在第 1 次洗脱时仍然留在磁珠上，从而导致抗体回收率降低。 6、抗体中和：在步骤 5 抗体洗脱液中加入一定量的 Neutrilization buffer，一般为抗体洗脱体积的1/10，最终使洗脱的抗体 pH 值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。 7 、磁珠后处理： 使用后的磁珠用 Elution buffer 洗涤 2 次， 磁性分离， 弃上清液； 接着用Binding/Washing buffer 洗涤 3 次，磁性分离，弃上清液，加入 200 μL Storage buffer 重悬磁珠，置于 2~8℃保存。 磁珠再生 1、磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白